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珊瑚菌(Ramaria botrytoides)属于多孔菌目Aphyllophorales,珊瑚菌科Clavariaceae,又名扫帚菌,含有多种氨基酸、矿质元素、维生素及碳水化合物。目前对珊瑚菌多糖的研究较少,仅有的研究集中在多糖的提取工艺及粗多糖清除自由基能力。本文将对珊瑚菌多糖关于提取工艺、分离纯化、结构鉴定、免疫活性及机制、抗肿瘤活性、抗氧化活性进行系统性研究,以期为珊瑚菌的开发利用做理论支持。以多糖得率为指标,设计正交实验优化提取工艺,确定珊瑚菌多糖最佳水提工艺为:提取温度90℃,料液比为1:30,提取3次,每次60min。在此条件下多糖的得率最高,为5.24%。提取珊瑚菌多糖,之后进行脱色、醇沉、脱蛋白,得到粗多糖RBP,得率为4.89%。将RBP过DEAE-52阴离子交换柱层析,得到珊瑚菌多糖RBP-Ⅰ、RBP-Ⅱ、RBP-Ⅲ,质量分别占上样量的16.50%、28.17%、7.17%。结合GPC及Sephadex G-100柱层析,判定RBP-Ⅰ为单一多糖,重均分子量Mw为15857Da;RBP-Ⅱ为混合多糖;RBP-Ⅲ为单一多糖,Mw为2188924Da。对珊瑚菌各精制多糖理化性质进行研究,发现RBP-Ⅰ、RBP-Ⅱ、RBP-Ⅲ性状分别为白色棉絮状、白色棉絮状、淡黄色棉絮状;均不含淀粉;蛋白含量依次为0、0、1.03%;总糖含量依次为86.94%、91.45%、81.07%;糖醛酸含量依次为5.14%、7.77%、4.87%。对单一多糖RBP-Ⅰ及RBP-Ⅲ进行结构分析:RBP-Ⅰ由鼠李糖、岩藻糖、阿拉伯糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖6种单糖组成,对应单糖摩尔比为1:6.53:1.99:8.29:70.05:53.80;RBP-Ⅲ由甘露糖、葡萄糖、半乳糖三种单糖组成,对应单糖摩尔比为4.76:4.61:1。红外光谱显示RBP-Ⅰ及RBP-Ⅲ均为多糖,均含有β-D-吡喃葡萄糖环及甘露糖。经高碘酸氧化及Smith降解,RBP-Ⅰ中含有1→6糖苷键、1→2、1→4糖苷键及1→3糖苷键,三者摩尔比为112.23:1:5.46,且以1→3糖苷键链接的主要是葡萄糖;RBP-Ⅲ中含有1→6糖苷键、1→2、1→4糖苷键及1→3糖苷键,三者的摩尔比为2.58:1:6.18,且以1→3糖苷键相连的单糖基有甘露糖、葡萄糖、半乳糖。经核磁分析,RBP-Ⅰ由6种单糖组成,构型分为α-吡喃糖及β-吡喃糖两种构型,主链主要以1→6糖苷键链接;RBP-Ⅲ由三种单糖组成,吡喃糖的构型也分为α、β两种类型,含有1→6糖苷键、1→2、1→4糖苷键及1→3糖苷键。珊瑚菌多糖的生物活性:各多糖样品具有一定的抗氧化活性,且与多糖浓度成正相关。对DPPH及ABTS+·的清除能力RBP-I优于其他多糖样品;对Fe3+的还原能力则粗多糖RBP最强;ORAC测得珊瑚菌多糖的抗氧化能力RBP-Ⅲ>RBP-Ⅱ>RBP>RBP-Ⅰ。珊瑚菌各多糖对人肝癌细胞HepG-2及人乳腺癌细胞MCF-7均有抑制作用,且与浓度成正相关。RBP-Ⅲ效果最佳,可与阳性对照5-Fu尿嘧啶相当,RBP-Ⅰ、RBP-Ⅱ次之,RBP抗肿瘤活性最弱。珊瑚菌各多糖单独作用于小鼠脾脏淋巴细胞时均可促进细胞增殖,但促进程度较低;当LPS或ConA协同作用于细胞时,RBP-Ⅰ、RBP-Ⅱ、RBP-Ⅲ及RBP均可促进淋巴细胞增殖,但是四者没有显著性差异。珊瑚菌多糖可促进巨噬细胞分泌NO、IL-6及TNF-α,并且具有剂量依赖性,促进作用RBP-Ⅰ最强,RBP-Ⅲ次之,RBP-Ⅱ及RBP较弱。RBP-Ⅰ、RBP-Ⅱ、RBP-Ⅲ及RBP均可使小鼠腹腔巨噬细胞RAW264.7的IL-6及TNF-α基因表达上调,促进免疫因子的产生,提高细胞免疫活性。