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目的脑卒中后抑郁(Post-Stroke Depression,PSD)是脑卒中后常见情感障碍类疾病之一。PSD严重影响患者神经功能和认知功能的康复,致其社会功能减退,增加死亡率,增加脑卒中所致的家庭经济负担、心理负担及社会成本。临床上已认识到PSD的临床重要性,但对其发病机制,目前仍不清楚。根据原发性抑郁的神经重塑机制障碍及前期研究结果,本课题提出了 PSD发病的“海马神经重塑障碍学说”,研究已表明脑卒中后的神经重塑与Notch信号转导通路有关。因此,本项目将围绕海马神经重塑,深入研究Notch信号分子通路对PSD发生发展的影响,探索PSD的发病机制及颐脑解郁复方的作用机制。方法将180只SPF级雄性SD大鼠(300±20g)随机分为假手术组、卒中组、PSD组、氟西汀(西药)组和颐脑解郁复方(中药)组,每组各36只。假手术组大鼠仅分离血管,不插入线栓;卒中组仅行大脑中动脉阻塞(MCAO)术,不进行束缚应激;PSD组、西药组、中药组大鼠在脑卒中后1周,应用慢性束缚应激(连续7d)复合单笼饲养的方法制备PSD大鼠模型。自大鼠造模开始至实验结束,西药组灌胃盐酸氟西汀胶囊,剂量为2.33mg/(kg·d),中药组灌胃颐脑解郁复方,剂量为9.92g/(kg·d),其余各组灌胃等体积蒸馏水,每日1次。于2、4、8周时,进行如下检测:1.每组各随机取6只大鼠,应用行为学测试(包括旷场试验、强迫游泳试验及蔗糖水偏爱度试验),对各组大鼠行为学表现进行评价;2.每组各取3只大鼠,应用HE染色方法,观察海马齿状回病理改变,并应用免疫组化的方法,检测海马齿状回5-HT的表达。3.每组取3只大鼠,应用免疫荧光双标的方法,观察海马齿状回神经干细胞的增殖分化情况。4.每组各取6只大鼠,采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)技术,检测各组大鼠左侧海马Notch通路上受体Notch1、配体Jagged1、转录因子Hes1、Hes5基因的表达。结果1行为学测试结果2周时,PSD大鼠水平、竖直活动次数较卒中组降低(P<0.05,P>0.05),强迫游泳试验中绝望时间增加(P<0.05),蔗糖水偏爱度下降(P>0.05);与PSD组相比,颐脑解郁复方组大鼠水平增加,竖直活动次数,绝望时间减少,蔗糖水偏爱度增加(P<0.01,P>0.05,P>0.05,P>0.05)。4周时,PSD大鼠水平、竖直活动次数较卒中组降低,强迫游泳试验中绝望时间增加,在蔗糖水试验中,蔗糖水偏爱度下降(P<0.01,P<0.05,P<0.05,P<0.01)差异均有统计学意义。颐脑解郁复方组大鼠较PSD组大鼠水平、竖直活动次数增加,绝望时间减少,蔗糖水偏爱度增加(P<0.01,P<0.05,P<0.01,P<0.01),差异均有统计学意义;8周时,PSD大鼠水平、竖直活动次数较卒中组降低,强迫游泳试验中绝望时间增加,蔗糖水偏爱度下降(P>0.05,P>0.05,P>0.05,P<0.01),颐脑解郁复方组大鼠较PSD组水平、竖直活动次数增加,绝望时间减少,蔗糖水偏爱度增加(P<0.05,P<0.05,P<0.01,P<0.01),差异有统计学意义。2各组大鼠海马齿状回病理改变HE染色后,观察各组大鼠海马齿状回的改变,2、4、8周时,PSD组大鼠海马齿状回细胞排列疏松,在颗粒细胞下层有细胞核深染的细胞;颐脑解郁复方治疗组大鼠,海马齿状回颗粒细胞层细胞排列密集,在颗粒细胞下层及颗粒细胞层,均有细胞核深染的细胞。3海马齿状回5-HT的表达2周、4周、8周时,PSD组大鼠海马齿状回5-HT的表达低于卒中组(P>0.05,P<0.01、P<0.05),4周、8周时,差异有统计学意义。颐脑解郁复方组大鼠海马齿状回5-HT的表达高于PSD组(P<0.01,P<0.01,P<0.01),差异均有统计学意义。4各组大鼠海马齿状回神经发生的变化2周时,PSD组大鼠新生细胞及神经干细胞均较少;颐脑解郁复方组大鼠海马齿状回新生细胞较多,神经干细胞数量增加,新生的神经干细胞较少。4周时,PSD组新生细胞及神经干细胞均较少;颐脑解郁复方组大鼠海马齿状回新生细胞较多,神经干细胞数量增加,神经干细胞及新生细胞迁移到齿状回颗粒细胞层,新生的神经干细胞数量较少。8周时,PSD组新生细胞及神经干细胞均较少;颐脑解郁复方组大鼠海马齿状回新生细胞及神经干细胞数量少,未观察到新生的神经干细胞。2周时,PSD组大鼠海马齿状回神经元细胞排列整齐,未观察到新生神经元细胞;颐脑解郁复方组大鼠海马齿状回新生细胞较多,分布于颗粒细胞下层,可观察到少量新生神经元细胞。4周时,PSD组新生细胞及神经元细胞均较少;颐脑解郁复方组大鼠海马齿状回新生细胞较多,新生神经元细胞较多,分布在海马齿状回颗粒细胞下层。8周时,PSD组神经元排列稀疏,新生细胞较少,未观察到新生神经元细胞;颐脑解郁复方组大鼠海马齿状回神经元细胞排列整齐,新生细胞较少,可观察到少量新生神经元细胞。2周时,PSD组大鼠海马齿状回星形胶质细胞明显增加,分布于颗粒细胞层及颗粒细胞下层,未观察到新生星形胶质细胞;颐脑解郁复方组大鼠海马齿状回新生细胞较多,星形胶质细胞数量较少,未观察到新生星形胶质细胞。4周时,PSD组新生细胞较少,大量星形胶质细胞分布于颗粒细胞下层及颗粒细胞层,可观察到少量新生星形胶质细胞;颐脑解郁复方组大鼠海马齿状回新生细胞较多,星形胶质细胞数量减少,少量新生星形胶质细胞分布于颗粒细胞下层。8周时,PSD组新生细胞较少,大量星形胶质细胞分布于颗粒细胞下层及颗粒细胞层,未观察到新生星形胶质细胞;颐脑解郁复方组大鼠海马齿状回新生细胞及星形胶质细胞数量较少,星形胶质细胞分布于颗粒细胞下层,未观察到新生星形胶质细胞。5各组大鼠海马Notch信号分子的变化2周时,各组大鼠海马Notch1基因的表达无统计学差异(P>0.05)。4周时,PSD组大鼠海马Notch1基因的表达明显低于卒中组(P<0.01);颐脑解郁复方组大鼠海马Notch1基因的表达较PSD大鼠明显增高(P<0.01)。8周时,各组大鼠海马Notch1基因的表达差异无统计学意义(P>0.05)。2周时,各组大鼠海马Jagged1基因的表达量无统计学差异(P>0.05)。4周时,PSD组大鼠海马Jagged1基因的表达低于卒中组(P>0.05);颐脑解郁复方组大鼠海马Jagged1基因的表达较PSD大鼠增高(P<0.01);8周时,PSD组大鼠海马Jagged1基因的表达明显高于卒中组(P<0.01)。药物治疗后,Jagged1基因的表达仍处于较高水平(P>0.05)。2周时,各组大鼠海马Hes1基因的表达量无统计学差异(P>0.05)。4周时,PSD组大鼠海马Hes1基因的表达低于卒中组(P>0.05),颐脑解郁复方组大鼠海马Hes1基因的表达较PSD大鼠明显增高(P<0.01)。8周时,各组大鼠海马Hes1基因的表达差异无统计学意义(P>0.05)。2周时,与卒中组相比,PSD组大鼠海马Hes5基因的表达降低(P<0.01);颐脑解郁复方组大鼠海马Hes5基因的表达较PSD大鼠明显增高(P<0.01)。4周时,PSD组大鼠海马Hes5基因的表达高于卒中组(P>0.05);颐脑解郁复方组大鼠海马Hes5基因的表达较PSD大鼠降低(P>0.05);8周时,PSD、颐脑解郁复方组大鼠海马Hes5基因的表达处于较高水平(P>0.05)。结论在大脑中动脉阻塞术基础上,应用慢性束缚应激及孤养的方法,在卒中后第4周,可建立稳定的PSD大鼠模型。颐脑解郁复方对PSD的发生有预防、治疗的作用。颐脑解郁复方可促进神经干细胞向神经元方向分化,抑制其向星形胶质细胞分化,对神经干细胞增殖的影响较小。颐脑解郁复方2周时提高Notch下游靶基因的表达,4周时提高Notch受体基因的表达,动态调节海马神经发生过程,最终改善PSD大鼠抑郁症状。