规模化蛋白质鉴定中的串联质谱数据评价方法研究

来源 :沈阳药科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:kunan8714
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鉴定复杂体系中的蛋白质时,随着样品复杂程度和实验流程的不同,往往生成几万到几十万张数量不等的二级谱图,其中只有10%~20%的谱图与肽段序列形成正确匹配,余下的二级谱图很多质量较差,导致大量随机匹配产生的假阳性肽段鉴定结果,并且阳性结果与假阳性结果之间有较大的重叠,难以直接区分,相应引起假阳性蛋白质鉴定结果的出现。事实上,蛋白质组学相关文献中报道的规模化蛋白质鉴定数据,都不同程度的存在错误的鉴定结果,甚至,一些在生物质谱方面缺乏经验的实验室,在鉴定蛋白质时认为所有的质谱鉴定结果都是准确无误的,不对其做进一步的处理。 搜索“逆转数据库”法,能够降低蛋白质串联质谱鉴定数据的假阳性率,提高数据的可靠性,并且使得来自不同技术路线、不同质谱仪器以及不同实验室的数据具有可比性。本研究对搜索“逆转数据库”法应用于肝脏样本的分析进行了初步考察。基于数据库搜索引擎SEQUEST软件的高通量蛋白质鉴定中,肽段的Xcorr值受肽段序列长短的影响,因此对于不同长度的肽段设置相同的判据显然是不合适的。本研究根据肽段的长度对Xcorr值进行校正,校正后,18种标准蛋白质的肽段鉴定数目,在+1,+2,+3电荷状态下同时考虑Xcorr和DetaCn时,分别增加了13.5%,17.5%和13.6%。时,肽段的整体鉴定数目增加了15.8%。实验证明,使用搜索“逆转数据库”法同时对Xcorr进行校正,能够增加肽段的鉴定数目,并且降低数据的假阳性率和假阴性率。
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