基于18S rDNA-FISH研究薯蓣属三个物种的核型

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薯蓣属(Dioscorea)是隶属于薯蓣科(Dioscoreaceae)的多年生藤本类植物。目前全球分布的薯蓣属植物大约有600种,它们的块茎多数具有可食性,是一种具有重要经济价值的块茎类作物。染色体核型研究可以为植物的遗传变异调控、系统发育分析以及亲缘关系鉴定提供细胞学参考资料,对种质资源的深度利用具有重要意义。同源染色体的准确识别是核型分析的关键环节。然而,由于薯蓣属植物染色体数量多、形态小,倍性复杂,导致传统的核型分析往往存在较大误差。目前荧光原位杂交技术在基因定位和染色体识别等领域已被广泛应用,借助该项技术可以帮助我们提高核型分析的精度。鉴于此,本研究为克服利用根尖制备染色体标本的局限性,拟通过优化酶解去壁低渗法中的材料幼嫩程度、预处理方法以及酶解时间,建立薯蓣属植物嫩叶染色体制备技术。然后以参薯18S r DNA为探针,首次利用荧光原位杂交技术对薯蓣属植物三个种参薯、褐苞薯蓣、黄独的特定染色体进行识别,并根据染色体定位结果来提高核型分析的精度。主要研究结果如下:(1)为了为薯蓣属植物的分子细胞学研究提供一种简便且实用的染色体制备方法,本研究建立了薯蓣属植物嫩叶染色体制备技术。结果表明:取刚展开的嫩叶,用0.002 mol/L 8-羟基喹啉于4℃下预处理2 h,再用3.5%纤维素酶和1.75%的果胶酶混合溶液于37℃下解离1 h,能获得较好的染色体制片。同时利用该方法成功获得了9份薯蓣属植物的有丝分裂中期染色体制片。染色体数目统计分析发现,这9份薯蓣属种质资源体细胞染色体数目介于2n=40到2n=80之间,且大多数材料的体细胞染色体数为2n=40。(2)基于18S rDNA-FISH技术的核型分析结果表明:体细胞染色体数目为2n=40的材料中期染色体和间期细胞核均存在2个18S r DNA杂交位点,体细胞染色体数目为2n=60的材料中期染色体和间期细胞核均存在3个18S r DNA杂交位点,体细胞染色体数目为2n=80的材料中期染色体和间期细胞核均存在4个18S r DNA杂交位点;染色体基数均为x=20;材料倍性分别为二倍体(2n=40)、三倍体(2n=60)和四倍体(2n=80);染色体绝对长度为0.43μm~2.86μm;染色体相对长度为2.18%~8.40%;染色体长度比为1.73~3.62;染色体相对长度指数为0.44~1.68。
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