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根据GenBank 上已登录的猪IL-4 基因(AY294020)、利用PrimerSelect 软件和Oligo5.0 软件设计了引物,用植物血凝素(PHA)和脂多糖(LPS)共同刺激分离的猪外周血淋巴细胞,提取总RNA,采用反转录PCR(RT-PCR)技术扩增猪IL-4 基因,将扩增到的基因与pGEM-T-easy 载体连接、转化后,经蓝白斑筛选、酶切、PCR 及测序鉴定;然后设计含酶切位点的表达引物,以重组质粒pGEM-T-IL-4 为模板进行扩增,所扩产物与原核表达载体pGEX-4T-1、真核表达载体pcDNA3.1 连接,构建原核、真核重组表达质粒;用ITPG分别在32℃和28℃条件下诱导重组原核表达载体,并提取不同诱导温度下的蛋白,并对表达的蛋白分别用Sephadex G-200 层析柱、GST柱进行纯化、然后用MTT法检测其生物学活性。真核表达质粒提取纯化后与TSO18、猪囊虫全虫疫苗联合佐剂免疫猪,用ELISA法检测抗体。本实验中成功的克隆的猪IL-4 基因,用序列分析软件分析:该序列与参考序列IL-4基因核苷酸序列同源性为99%,氨基酸的同源性为97.8%,其包括一个完整的阅读框,大小为402bp,编码134 个氨基酸;与其它猪种IL-4 基因阅读框比较显示同一物种间基因的保守性很强。研究中成功的构建了猪pGEX-4T-1-IL-4、pcDNA3.1-IL-4 表达质粒。SDS-PAGE结果显示重组原核表达质粒在两种温度都表达分子量为38KD左右蛋白,与预测的相一致;在32℃目的蛋白主要以包涵体表达,表达产物约占菌体总蛋白的30%;在28℃时可表达部分可溶性蛋白。用MTT检测结果表明这两种蛋白都能够促进淋巴细胞的增殖分化,证明纯化后的蛋白具有生物学活性;真核表达质粒免疫猪抗体滴度明显高于各对照组,说明猪IL-4 基因重组真核表达载体对猪囊虫全虫疫苗有良好的免疫佐剂作用,优于传统使用的206 佐剂。这为为研制新型的高效免疫佐剂和生物制剂奠定基础。