论文部分内容阅读
病理性瘢痕严重影响美观、功能，降低患者生活质量，因此科研工作者长期以来试图采用多种办法治疗病理性瘢痕，包括药物、手术、压力、放射等等，但仍未取得满意的疗效。我们实验组致力于寻找比较满意的防治办法，在前期研究基础上，继续探索羟基喜树碱对另一转导通路NF-κB的影响。目的：拟通过羟基喜树碱（hydroxycamptothecin，HCPT）对人增生性瘢痕成纤维细胞(hypertrophicscar fibroblasts HSFB)进行培养干预，检测成纤维细胞NF-κBp65、IκBαmRNA及蛋白表达，以期了解羟基喜树碱在增生性瘢痕成纤维细胞中对NF-κB转导通路的影响。方法：标本取自我院整形科患者(伤后5月)，采用组织块和组织块消化培养法，体外培养成纤维细胞第4-8代后，分为4组，空白对照组，加入成纤维细胞无血清培养基；实验组：加入含有成不同浓度羟基喜树碱（125、250、500ng/ml）无血清培养基作用培养24小时。采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR法）检测NF-κB p65、IκBαmRNA表达，蛋白印迹法（Western-blot）法检测NF-κB p65、IκBα蛋白表达。结果:1、各浓度羟基喜树碱作用24小时后NF-κB p65、IκBαmRNA表达灰度比值为：500ng/ml组（0.790±0.038、0.664±0.086），250ng/ml组（0.562±0.051、0.762±0.067），125ng/ml组（0.268±0.032、0.870±0.051），空白组（0.104±0.032,0.974±0.039），各组差异有统计学意义（P<0.05)；NF-κB p65、IκBαmRNA灰度比值两两比较也有差异（P<0.05)。实验结果表明，各浓度（125、250、500ng/mL）羟基喜树碱作用后增生性瘢痕成纤维细胞NF-κB p65mRNA表达升高、IκBαmRNA表达降低。2、各浓度羟基喜树碱作用24小时后NF-κB p65、IκBα蛋白表达灰度比值为：500ng/ml组（0.765±0.023、0.555±0.021），250ng/ml组（0.593±0.015、0.736±0.016），125ng/ml组（0.455±0.012、1.060±0.033），空白组（0.314±0.016，1.093±0.021），各组差异有统计学意义（P<0.05)；蛋白表达水平灰度比值两两比较也有差异（P<0.05)。实验结果表明，各浓度（125、250、500ng/mL）羟基喜树碱作用后增生性瘢痕成纤维细胞NF-κB p65蛋白表达升高、IκBα蛋白表达降低。结论：羟基喜树碱可能通过减少IκBα表达，从而促进NF-κB p65表达，影响瘢痕形成。