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目的:分析不同恶性程度膀胱癌组织中RAB14的表达水平,并探究其表达水平与膀胱癌临床分期、分化程度、有无远处转移等临床病理因素之间的相关性。采用基因芯片高通量筛选RAB14表达干扰后膀胱癌细胞的基因表达变化,预测RAB14下游的关键互作基因及分子机制。通过免疫组化和western blot等方法检测及验证RAB14表达下调后其下游关键基因及分子的蛋白翻译水平变化,探究RAB14在膀胱癌发生发展中的可能作用机制。方法:收集2013年1月至2018年12月于我院行全膀胱根治性术的膀胱癌组织标本80例及正常膀胱组织30例;采用免疫组化法检测RAB14在膀胱癌组织及正常膀胱组织中的表达,分析其表达水平与胱癌临床分期、分化程度、有无远处转移等临床病理因素之间的关系;体外培养不同的膀胱癌细胞株,采用qRT-PCR检测RAB14基因在各细胞中的表达水平,分析其表达差异。采用慢病毒技术构建RAB14表达干扰的细胞模型,采用高通量基因表达谱芯片技术筛选RAB14表达变化后膀胱癌细胞中基因表达的变化,预测RAB14的下游关键互作基因及分子机制。通过免疫组化法检测上述基因芯片高通量筛选的MAPK通路相关蛋白MAPK1的表达,分析其表达与RAB14的相关性;在构建RAB14干扰的细胞模型基础上,采用Western blot检测RAB14表达改变对MAPK通路相关蛋白MAPK1、MAPK8、DUSP6、FOS及SHC1的表达的影响。结果:1.膀胱癌组织中RAB14基因的表达水平要高于正常的膀胱黏膜,差异显著(P=0.0128),且侵袭性膀胱癌组织中RAB14的表达水平要明显高于非侵袭性膀胱癌组织,差异有统计学意义(P<0.05);RAB14表达水平与膀胱癌的有无淋巴结转移(P=0.001)、临床TNM分期(P=0.009)、肿瘤细胞分化程度(P=0.000)呈正相关。qRT-PCR检测结果表明,与J82低转移潜能细胞相比,RAB14在高转移潜能的膀胱癌细胞株5637和T24中的表达明显增高,差异有统计学意义(P均<0.05)。2.qRT-PCR检测KD组RAB14基因敲减效率相比NC组达到53.3%,RAB14敲减效果佳。PCA分析KD组和NC组之间差异较大,提示样本质量较好。基因芯片结果显示RAB14表达下调后,膀胱癌细胞5637中表达上调的基因共有498个,表达下调的基因有551个,GO富集分析差异表达基因的生物学途径(Biological process)主要富集在细胞凋亡的正负调控及细胞迁移上;细胞内组分(Cellular components)主要富集在胞外外泌体、细胞质基质及细胞质中;分子功能(Molecular function)主要体现在具有调节GTP酶活性、与蛋白质结合、与表皮生长因子受体结合及具有激酶活性等生物学功能。KEGG通路分析显示其差异表达基因主要富集在MAPK signaling pathway、Pathways in cancer、Pertussis、FoxO signaling pathway等信号通路上。3.免疫组化结果表明膀胱癌组织中MAPK1染色呈强阳性,其表达趋势与RAB14表达趋势正相关,即在癌组织中RAB14低表达时,MAPK1表达强度亦偏弱,在RAB14高表达的膀胱癌组织中MAPK1的表达强度则偏强;Western blot结果表明RAB14表达被干扰后,膀胱癌细胞中MAPK1和MAPK8的蛋白表达水平明显降低,而DUSP6,FOS及SHC1的蛋白表达水平则明显升高。结论:1.RAB14是一个与膀胱癌关系密切的基因,其在其癌组织及癌细胞中呈较高表达水平,且其表达水平与膀胱癌临床分期、肿瘤细胞分化程度及有无远处转移等临床病理因素呈正相关;2.基因芯片高通量数据显示,RAB14干扰表达后,影响多个基因的表达改变和多条信号通路传导被激活或被抑制,其中ERK/MAPK信号通路被显著抑制;3.RAB14通过上调MAPK1和MAPK8的表达并下调DUSP6、FOS和SHC1的表达,从而促进膀胱癌细胞的进展。