AG490、顺铂联合用药对上皮性卵巢癌细胞SKOV3增殖、凋亡的影响及其作用机制的实验研究

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目的应用JAK激酶抑制剂AG490与顺铂联合用药,探讨其对上皮性卵巢癌细胞SKOV3增殖、凋亡的影响;同时检测癌基因STAT3及凋亡相关因子Survivin、Bcl-2 mRNA表达情况,探讨JAK激酶抑制剂AG490阻断STAT3信号转导通路治疗卵巢恶性肿瘤的可行性与作用机制,为卵巢恶性肿瘤的治疗提供理论基础和实验依据。方法1.应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测24h、48h、72h卵巢癌细胞SKOV3的生长抑制率。对照组:加RPMI-1640培养液AG490组:20μmol/L、40μmol/L、80μmol/L三个浓度组顺铂组:20μg/mL、40μg/mL、80μg/mL三个浓度组联合组:20μmol/L、40μmol/L、80μmol/LAG490分别联合20μg/mL、40μg/mL、80μg/mL顺铂,共九组2.流式细胞仪检测48h SKOV3细胞的早期凋亡率和晚期凋亡率,实验分组与MTT法分组相同。3. RT-PCR法检测48h卵巢癌细胞SKOV3的STAT3及Survivin、Bcl-2 mRNA表达情况。对照组:加RPMI-1640培养液AG490组:40μmol/L顺铂组:40μg/mL联合组:40μmol/L AG490联合40μg/mL顺铂结果1. AG490、顺铂及其联合用药对卵巢癌细胞SKOV3增殖的影响单独应用AG490、顺铂均能够抑制卵巢癌SKOV3细胞增殖,均随药物浓度和作用时间增加细胞增殖抑制率上升,具有浓度依赖性和时间依赖性。各时间组不同药物浓度比较细胞增殖抑制率有统计学差异(p<0.01),同一浓度组不同作用时间比较也有统计学差异(p<0.05)。联合用药组对细胞的增殖抑制率高于单独应用AG490、顺铂组(p<0.01),AG490与顺铂联合用药能显著提高对SKOV3细胞的杀伤力。各时间组不同浓度联合组比较细胞增殖抑制率有统计学差异(p<0.01),相同浓度联合组不同作用时间比较也有统计学差异(p<0.01),随药物浓度和作用时间增加细胞增殖抑制率上升,具有浓度依赖性和时间依赖性。2. AG490、顺铂及其联合用药对卵巢癌细胞SKOV3细胞凋亡的影响AG490、顺铂均能够促进卵巢癌SKOV3细胞凋亡,并随药物浓度的增加细胞凋亡率增加,具有浓度依赖性,差异具有统计学意义(p<0.01)。AG490与顺铂联合用药能够进一步促进卵巢癌SKOV3细胞凋亡,联合组对细胞的凋亡率高于单独应用AG490、顺铂组(p<0.01),不同浓度的联合组各组之间两两比较也有统计学差异(p<0.01),随药物浓度的增加细胞凋亡率增加,具有浓度依赖性。3. AG490、顺铂及其联合组的STAT3、Survivin及Bcl-2 mRNA的表达下调,与对照组比较,差异具有统计学意义(p<0.01),联合组的STAT3、Survivin及Bcl-2 mRNA表达低于单独应用AG490、顺铂组(p<0.01)。结论1. AG490可通过阻断STAT3信号途径抑制卵巢癌细胞STAT3的持续活化,抑制其增殖,诱导其凋亡,并具有浓度依赖性和时间依赖性。2. AG490诱导卵巢癌细胞发生凋亡,其作用机制可能与JAK/STAT3信号转导通路直接调控Survivin、Bcl-2等凋亡相关因子的表达有关。3. AG490与顺铂联合用药可使细胞增殖下降、凋亡上升,顺铂可能促进AG490阻断STAT3活化,AG490可能增强化疗敏感性,两者协同作用可提高卵巢癌治疗效果。
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