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目的:Eph受体是已知最大的酪氛酸蛋白激酶受体家族。Eph受体及其膜附着配体ephrins在发育过程中呈现不同的表达模式。功能分析表明,该家族在包括神经网络形成、神经管和轴旁中胚层的成型(patterning)、细胞迁移和神经轴突导向、血管发生等方面具有重要功能。Eph受体及其配体也与肿瘤发生有关,因此深入分析这些分子的功能特别是在肿瘤生长中的作用而应用于临床治疗具有重要的临床意义。EphB2是1994年Kiyokaw等从胃癌组织cDNA文库中筛选出的Eph亚类中又一新基因,参与调节细胞的生长和分化,介导胞外信号向细胞内部的传递,导致细胞迁移、聚集和靶向等生理效应。近来被发现其在大肠腺瘤和大肠腺癌中作用显著,胃癌中曾有报道在原发灶和转移灶中表达存在差异,但在胃癌发生发展中的机制仍然不明。研究该基因在胃癌中的表达以及与临床病理特征和预后的关系,可以进一步明确EPHB2基因在胃癌演变中的作用。另外,检测EPHB2在胃癌组织中的突变及等位基因缺失情况对阐明胃癌的发生机制具有指导意义。方法:1.构建含337例胃癌的组织芯片,用免疫组化方法观察337例正常粘膜、337例原发癌、50例淋巴结转移组织中EphB2的表达,比较它们在原发灶、正常组织、转移灶的表达差异;2.应用PCR-SSCP检测了EphB2基因在13例阴性胃癌中的基因突变情况。3.应用LOH方法观察EphB2基因在13例阴性胃癌中染色体等位基因缺失情况;结果:1.构建六张组织芯片,其中含有337例癌旁正常组织,337例胃癌原发灶,50例淋巴结转移组织。免疫组化结果显示EphB2的表达随肿瘤的发生和进展逐渐下降。EphB2在正常粘膜、原发癌、淋巴结转移组织中的表达率分别为:100%(337/337)、47.5% (160/337)和18%(9/50)。正常粘膜组织中EphB2的表达率显著高于肿瘤细胞中的表达(P﹤0.05)。淋巴结转移组织中的表达又显著低于原发癌中的表达(P<0.05)EphB2阳性表达与肿瘤的大小、侵润深度、淋巴结转移、肿瘤分化程度及临床病理分期明显相关(P < 0.01)。2.生存分析表明,EphB2表达缺失与中位生存时间下降明显相关。此外,多变量分析Cox比例风险模型显示:同肿瘤的分化程度、侵润深度和淋巴结转移一样,EphB2的缺失表达也是胃癌的独立预后因素。3. PCR-SSCP结果表明EphB2基因在胃癌组织中没有大片段的插入或缺失,SSCP结果显示:原发灶、转移灶及癌旁组织均未出现EPHB2基因泳动变位,提示在胃癌中突变不是引起EphB2基因功能丧失的主要原因。4. LOH结果显示EphB2位点附近存在杂合缺失,在13例胃癌原发灶中,D1S2864、D1S512、D1S3214、D1S2698和D1S458的缺失率分别为2例(15.4%)、1例(7.7%)、2例(15.4%)、1例(7.7%)和4例(30.8%),总的缺失率为61.5%。在13例淋巴结及转移灶中,D1S2864、D1S512、D1S3214、D1S2698和D1S458的缺失率分别为6例(46.2%)、4例(30.8%)、4例(30.8%)、4例(30.8%)和4例(30.8%),总的缺失率为84.6%。提示在胃癌中杂合性缺失可能是引起EphB2基因功能丧失的主要原因。结论:1.免疫组化结果显示EphB2在胃癌原发灶及转移灶中低表达,提示EphB2基因在肿瘤进展中可能发挥重要的转移抑制作用。2.生存分析显示EphB2表达缺失与中位生存时间下降明显相关,提示该基因可能成为临床预后分析的重要参考指标。3. 1号染色体1p35-36.1区EphB2位点的高频杂合性缺失可能是导致EphB2基因功能缺失的主要原因。4.在胃癌中突变不是导致EphB2基因功能丧失的主要原因。5.肿瘤转移是一个遗传改变逐步积累的结果,EphB2表达下调在胃癌发展及转移中可能起重要作用。