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多环芳烃(Polycyclic Aromatic Hydrocarbons,PAHs)是一类广泛分布于天然环境中的有毒有机污染物,难于生物降解。环境中的PAHs易进入生物体和沉积物中,并通过食物链进入人体,对人类健康和生态环境具有很大的潜在危害。生物修复的生物强化技术是治理多环芳烃污染的重要方法。An2是高效多环芳烃降解菌,铜绿假单胞菌具有较好的产生物表面活性剂的能力,本实验通过对An2低能N~+诱变和铜绿假单胞菌绿色荧光蛋白标记,然后进行细胞电融合,以期得到降解多环芳烃能力更强的遗传修饰菌。主要内容包括以下几个方面: 1.根据增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因设计了上下游引物P1和P2,通过对铜绿假单胞菌绿色荧光蛋白标记研究,构建了铜绿假单胞菌标记系统,获得带有EGFP标记的菌株,为进行相关的跟踪研究创造了条件。该菌株绿色荧光标记性能稳定,通过转化子基因组DNAPCR和斑点杂交检测,外源EGFP基因存在于转化子染色体上。 2.通过蒽降解菌An2低能N~+诱变,获得突变株An815,对蒽的耐受能力和降解能力显著提高。 3.通过对An815和带EGFP标记的铜绿假单胞菌原生质体制备与再生进行正交实验,探讨各因子对原生质体制备与再生影响水平,确定原生质体制备与再生的最优条件。 4.通过An815与带EGFP标记的铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa/EGFP)原生质体电融合,得到一株融合子R2,该融合子不仅具有An815菌高效降解蒽的能力,而且具有铜绿假单胞菌产生生物表面活性剂的能力,蒽的降解效率显著提高。 5.通过采用摇瓶好氧试验,用融合子R2改善常规生物处理,对焦化废水进行了生物强化降解初步研究。加入融合子R2的改良污泥对焦化废水COD的去除率达到66.4%,与对照组相比提高了16.2%,证明融合子R2投加提高了活性污泥对焦化废水的降解率,在焦化废水的降解中具有应用潜力。