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血栓栓塞性疾病(thrombotic disease, TD)发病率、致残率、致死率皆高,已成为严重危害人类健康的疾病之一。药物溶栓是目前临床应用最广泛、最有效的治疗手段。迄今为止,溶栓剂已发展了三代,但依然存在一定的缺陷,仍有待开发安全有效的新型溶栓剂。本研究旨在从微生物中开发出一种新型溶栓剂。从自然界分离的一株胞外产纤溶酶的芽孢杆菌B-60菌株,通过对它的形态、生理生化特征进行研究,对其16S rDNA序列进行测定与比对,发现芽孢杆菌B-60菌株与假蕈状芽孢杆菌的形态、生理生化特征相符,与其16S rDNA序列也有高达99.38%的同源性。根据多相分类原则,认为芽孢杆菌B-60菌株为假蕈状芽孢杆菌(Bacillus pseudomycoides)。采用单因子试验和正交试验对产纤溶酶的假蕈状芽孢杆菌B-60的发酵条件进行优化。产纤溶酶最佳条件为：蔗糖15 g/L,豆饼粉15 g/L, MnSO4·H2O 3.4 g/L, CaCl2 3.3 g/L, K2HPO4·3H2O 0.8 g/L, KH2PO4 0.2 g/L, MgSO4·7H2O 7.4g/L;培养温度32℃,培养基初始pH6.5～7.0,装液量250 mL的三角瓶50 mL,接种量2%～6%,发酵时间56 h左右。Ca2+、Mg2+、K+、Mn2+对酶活有促进作用,Zn2+、Fe2+对酶活有强烈抑制作用。优化后,点样10μL发酵液溶圈直径为19.5mm,溶圈面积为298 mm2。利用硫酸铵沉淀和阴离子交换色谱从假蕈状芽孢杆菌B-60菌株中分离纯化出具有纤溶活性的单体蛋白单一组分(BpFE),并对BpFE性质进行分析。BpFE表观分子量为34 kD。它在4℃～50℃活性较稳定,50℃以上活性急剧下降；作用最适pH值为pH5～6,在pH5-10活性较稳定,在pH3.0,活性几乎丧失；金属离子Ca2+, Mg2+, Mn2+对酶活有轻微促进作用,Cu2+则强烈抑制酶活。苯甲基磺酰氟(PMSF)完全抑制它的活性。BpFE经胰蛋白酶和胃蛋白酶降解后,活性上升。N端15个氨基酸序列为VTGTN AVGTG KGVLG,比对结果表明,BpFE N端氨基酸序列与蜡状芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌、炭疽杆菌和乳杆菌的bacillolysin, neutral protease, hydrolase的一部分序列同源性为100%。