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Barrett食管(Barrett’s esophagus,BE)是由食管下段的复层鳞状上皮被化生的单层柱状上皮所替代发展而来。研究发现,Barrett食管与食管腺癌(esophageal adenocarcinoma,EAC)的发生密切相关,Barrett食管患者发生食管腺癌的危险性比普通人群增加30倍。Barrett食管粘膜的癌变是一个多阶段复杂的过程,经历化生-间变-癌变三个阶段。胆汁作为十二指肠反流物的重要反流物质,在胃食管反流病,如反流性食管炎、Barrett食管及其并发食管腺癌的发生发展过程中起重要作用。脱氧胆酸(Deoxycholic acid,DCA)作为胆汁的重要成分,与Barrett食管和食管腺癌的发生密切相关。但其诱导Barrett食管和食管腺癌发生发展的具体机制目前尚不明确,有待于进一步研究。p38分裂激活蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase,p38MAPKs)是一种丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶,作为细胞间信号传导通路的作用途径之一,它在外界各种刺激条件的作用下,活化为磷酸化p38(p-p38)参与细胞内凋亡、分化、炎症、应激等。研究发现,在细胞向肠道上皮的生长和分化过程中p38MAPKs的表达显著增加,特异性的分布于小肠的绒毛上皮细胞核中。近年来利用小肠特异性标志物蔗糖-异麦芽糖酶及粘蛋白分泌物检测食管腺癌术后复发的研究显示,肠化生型Barrett食管与正常小肠上皮存在共性。同源异型框转录因子(caudal-related homeodomain transcription 2,CDX2)在正常生物体发育过程中对消化道特别是结肠和小肠上皮的发育起着关键的作用,但在正常食管和胃黏膜上皮中不表达。反流性食管炎所致的Barrett食管中食管的鳞状上皮被肠上皮所代替,CDX2的表达呈明显增强趋势。近期有国内学者研究证实,在胃黏膜病变中p-p38在肠化生形成中对CDX2表达可能起正向调节作用。然而在Barrett食管的发生机制中,是否也存在p38MAPKs信号转导通路通过调节CDX2表达诱导Barrett食管肠化生,国内尚未见报道。目的:应用脱氧胆酸诱导体外培养正常食管黏膜上皮细胞,从p38MAPKs信号转导通路入手,探讨脱氧胆酸诱导Barrett食管的发生机制。方法:经HE染色检验,仅选取病理诊断正常的食管黏膜标本进行细胞培养。免疫细胞化学方法鉴定体外培养的食管黏膜上皮细胞为有增殖能力的食管黏膜上皮细胞。实验应用不同浓度的脱氧胆酸及p38MAPKs特异抑制剂SB203580干预人正常食管上皮细胞,用Western blot方法检测p38、p-p38和CDX2蛋白的表达变化,评估p-p38和CDX2表达变化的相关性。结果:1脱氧胆酸对p-p38蛋白表达的影响Western blot分析显示,与空白对照组相比,不同浓度DCA(100μmol/L、250μmol/L、500μmol/L、1000μmol/L)作用于食管上皮细胞24h后,t-p38的表达量没有明显变化,对照组表达为(73.2±1.3),实验组表达分别为(76.8±1.5)、(77.8±1.9)、(75.5±2.3)、(72.6±1.0)。而随着DCA浓度的逐渐增高,p38磷酸化的水平逐渐增多,在500μmol/L时p38磷酸化水平最高,对照组表达为(13.7±1.0)%,实验组表达分别为(17.1±1.4)%、(29.7±2.1)%、(44.0±1.7)%、(26.0±1.5)%。实验组p38磷酸化水平均高于对照组,分别为p<0.05、p<0.01、p<0.01,差异有统计学意义。不同浓度实验组之间比较p<0.05,差异有统计学意义。2脱氧胆酸对CDX2蛋白表达的影响Western blot分析显示,空白对照组CDX2蛋白无表达,随着DCA浓度的逐渐增高,CDX2蛋白的表达逐渐增高,分别为(0.42±0.03)、(5.63±0.52)、(8.59±1.25)、(6.19±1.16),在500μmol/L时CDX2蛋白的表达量最高。100μmol/L组与空白对照组比较p>0.05,差异无统计学意义。250μmol/L、500μmol/L、1000μmol/L组与空白对照组和100μmol/L组比较均为p<0.01,差异有统计学意义。3阻断p38MAPKs信号转导通路后,脱氧胆酸对p-p38和CDX2蛋白表达的影响先用20μmol/L的p38MAPKs特异性抑制剂SB203580预处理食管上皮细胞2h,用PBS冲洗3次,加入含有500μmol/L DCA的D-KSFM培养基继续培养24h,p38磷酸化水平较单用500μmol/L DCA处理的食管上皮细胞明显降低((28.3±2.2)% vs (50.5±9.5)%, p<0.01),但仍高于空白对照组((28.3±2.2)% vs (13.8±0.9)%, p<0.05)。而SB203580本身对p38磷酸化水平无影响((14.9±7.7)% vs (13.8±0.9)%,p>0.05)。上述同样的分组处理测CDX2蛋白的表达量,空白对照组与SB203580组均无CDX2蛋白表达,SB203580+DCA组蛋白表达量(0.94±0.13)明显低于DCA组(2.31±0.41),p<0.01差异有统计学意义。结论:1脱氧胆酸可以诱导人正常食管黏膜上皮细胞p38磷酸化水平增加,并在一定程度上随着浓度的增加效果更强。2 CDX2在正常食管黏膜上皮中不表达,脱氧胆酸可以诱导人正常食管黏膜上皮细胞CDX2表达,且在一定程度上呈浓度依赖性增加,并与p38磷酸化水平呈正相关,表明Barrett食管肠化生的发生与p38磷酸化激活有关。3应用p38MAPKs特异性抑制剂SB203580可以显著降低p38磷酸化水平和CDX2的表达,可以作为预防Barrett食管的新思路。