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目的:1.研究高毒力肺炎克雷伯菌血流感染的流行特征及危险因素分析,为临床合理治疗和防治高毒力肺炎克雷伯菌血流感染提供科学依据。2.探究血流感染中高毒力肺炎克雷伯菌毒力、分子流行病学特征及其对中性粒细胞功能的影响。3.初步探究高毒力肺炎克雷伯菌延迟中性粒细胞凋亡的调控机制。方法:1.收集南昌大学第一附属医院2014年1月-2016年12月住院患者血液标本分离出的肺炎克雷伯菌178株。采用肠杆菌科基因间重复一致序列聚合酶链反应(ERIC-PCR)与多位点序列分析法(MLST)确定主要基因分型及其病区分布。2.聚合酶链式反应(PCR)及测序技术确定其血清荚膜分型及毒力基因携带,本研究定义凡是符合以下任何一项:携带K1、K2、rmpA/rmpA2基因或者高黏液表型阳性的菌株为高毒力菌株,否则为非高毒力菌株;查询统计分析这178例患者的临床资料,实验分为高毒力菌株组与非高毒力菌株组,运用单因素分析和多因素logistic回归分析高毒力肺炎克雷伯菌血流感染的危险因素。3.收集南昌大学第一附属医院2016年6月-2016年12月住院患者血标本分离出的肺炎克雷伯菌55株,PCR扩增及测序确定其wzi分型,PCR扩增确定其ompK36等位基因分群(A、B、C、D),用血清抗性、抗中性粒细胞吞噬试验来研究肺炎克雷伯菌的体外毒力性;采用流式细胞仪检测患者外周血中性粒细胞表面分子表达的变化,采用ELISA检测患者体内炎症因子的释放量。4.建立体外中性粒细胞感染模型和体内腹腔感染脓毒症动物模型,采用Western-Blot检测中性粒细胞凋亡调控蛋白的表达情况。结果1.178株血流感染肺炎克雷伯菌,主要基因分型是ST11型,其中HvKP菌株以ST23型为主。主要见于消化科、烧伤科、神经外科、重症医学科,且呈现克隆性传播。2.伴有糖尿病基础疾病、引流、血型(A型)、使用喹诺酮类及碳青霉烯类抗菌药物是HvKP血流感染的独立危险因素。3.在55株血流感染KP中,有20株HvKP菌株,35株non-HvKP菌株。HvKP菌株的MLST分型以ST23和ST65为主,而non-HvKP菌株则以ST11型为主;HvKP菌株的ompK36等位基因以C群为主,而non-HvKP菌株则以A群和D群为主;HvKP菌株的荚膜血清分型以wzi2-K2和wzi1-K1为主,而non-HvKP菌株则以wzi64-K64分型为主。4.在20株血流感染HvKP中,有16株表现出高水平的血清抗性能力,而在35株non-HvKP中,仅有4株表现出高水平的血清抗性能力;HvKP菌株携带毒力相关基因数多于non-HvKP菌株。5.在抗中性粒细胞吞噬方面,大部分non-HvKP菌株的中性粒细吞噬率均在55-80%左右,而大部分HvKP菌株的中性粒细胞吞噬率在30%左右。6.相比较non-HvKP组,HvKP组患者体内PD-1、CD86表达明显下调,而PD-L1、CD80明显变化;HvKP组患者体内IL-2、IL-8、IL-1β释放量明显增多,而TNF-α释放量明显降低。7.在HvKP感染的早期,HvKP感染组NF-κB P65蛋白含量显著高于non-HvKP感染组;HvKP感染组Bax/Bcl-2的比值显著低于non-HvKP感染组;HvKP感染组Caspase-3,8,9蛋白含量显著低于non-HvKP感染组。结论:1.在本院血流感染KP菌株的MLST分型以ST11为主,而血流感染HvKP菌株以ST23、ST65型为主。2.通过本文对HvKP血流感染的危险因素分析,提示我们要特别重视合并有慢性内科基础疾病,特别是伴有糖尿病的血流感染KP患者;其次要注意引流操作的无菌意识及引流时间和碳青霉烯类、喹诺酮类抗菌药物的合理使用。3.HvKP菌株的ompK36等位基因以C群为主,荚膜血清分型以wzi2-K2和wzi1-K1为主。4.相比较non-HvKP菌株,HvKP菌株携带毒力相关基因数较多,血清抗性能力和对中性粒细胞吞噬能力均较高。5.HvKP血流感染患者体内炎症因子的释放量改变以及PMN表面分子的表达紊乱,提示HvKP感染可能使PMN的功能发生了变化。6.我们推测在HvKP感染的早期,HvKP诱导PMN凋亡延迟的作用可能是通过调节Bax/Bcl-2比值使Caspase-3,8,9的表达下调,进而激活NF-κB,从而延迟中性粒细胞的凋亡。