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猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)严重危害全球养猪业。PRRSV现分为欧洲型和美洲型两个基因型,两型毒株之间基因差异大,美洲型毒株之间的基因差异更大。PRRSV基因型的存在和基因的多变性,给临床诊断和疫苗研发应用提出了挑战。核衣壳蛋白N蛋白由ORF7编码,美洲型与欧洲型毒株N蛋白各含123和128个氨基酸,N蛋白在全病毒中含量最高,免疫原性最强,是病毒感染后最早诱导产生特异性非中和抗体的蛋白。因此,PRRSV N蛋白在病毒的早期诊断和致病免疫机理研究中具有重要意义。为了快速诊断和检测PRRSV,研究了应用RT-PCR和基因测序技术快速检测PRRSV是否美洲型和高致病性变异株的分子诊断方法。根据参考株IAF-exp91和LV ORF7基因序列设计出2对引物,引物S1R1是一对特异性引物,它只能扩增美洲型PRRSV基因序列,不能扩增欧洲型PRRSV基因序列；引物S2R2可以扩增美洲型和欧洲型的PRRSV序列。用两对引物扩增两河南分离株PRRSV HN07-1和]HN07-2,发现两引物均克隆出了相对应的碱基序列,并且ORF7基因的长度均为372bp,编码123个氨基酸,测定的序列完全相同。进而用DNAStar软件对两河南分离株的ORF7序列与在GenBank上选取的24株PRRSV ORF7序列进行比较分析。结果显示,本试验克隆的ORF7序列与三株欧洲型PRRSVORF7序列的同源性在65.1%—66.9%之间,与美洲型PRRSV ORF7序列同源性在92.2%—99.7%之间,且与中国分离株EF112446(HUB2)、EF112447(HEB1)、EF075945(HUB1)的同源性高达99.5%,与中国分离株EF112445(JXA1)同源性高达99.7%。根据高致病性PRRSV Nsp2基因的缺失信息设计并合成了3条引物,经过RT-PCR,引物P1P3可以扩增出438bp的碱基序列,引物P2P3可以扩增出217bp的碱基序列。对病毒核酸的检测与分析结果表明,PRRSV河南分离株HN07-1和HN07-2均属于美洲型毒株且都是高致病性PRRSV变异株。为了给PRRSV地方分离株N蛋白的研究与应用提供物质基础,本研究首先成功克隆到PRRSV河南分离株HN07-1和HN07-2的N蛋白基因并登录于GenBarnk(登录号HQ025967)。本研究成功构建了PRRSV河南分离株N蛋白的原核重组表达质粒pGEX-6p-1-N及其表达菌,成功进行了重组N蛋白的可溶性表达,并获得其优化表达的条件参数和表达蛋白的纯化方法。对所表达纯化的N蛋白的免疫原性进行了检测与分析。