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本论文以脊尾白虾为研究对象,利用盐析、离子交换层析和分子筛层析等方法从脊尾白虾肝胰腺中分离纯化到两种天然脊尾白虾几丁质酶（分别命名为Ec Chi1和Ec Chi2）,并对酶活及比活力较高的Ec Chi1进行了酶学特征分析及酶动力学参数计算。利用LC-ESI-MS/MS对Ec Chi1和Ec Chi2进行鉴定,结合实验室已有的脊尾白虾转录组数据,利用生物信息学方法分析,PCR验证得到了Ec Chi1和Ec Chi2全长c DN A序列;根据脊尾白虾转录组数据注释信息,结合RACE的方法,获得了另外两条脊尾白虾几丁质酶的全长c DNA序列（命名为Ec Chi3和Ec Chi4）。分析了四个几丁质酶基因在脊尾白虾不同组织、不同蜕皮时期的表达模式;并通过RNA干扰分析了四个几丁质酶基因的功能;利用p DHsp70FLAG-His表达载体和昆虫细胞表达系统对脊尾白虾Ec Chi1、Ec Chi2、Ec Chi3进行体外重组表达,获得了重组表达蛋白。取得的主要结果如下:1.利用盐析和蛋白质层析技术从脊尾白虾肝胰腺中分离纯化出两种几丁质酶,分别命名为Ec Chi1和Ec Chi2。Ec Chi1和Ec Chi2酶活力单位分别为21.80 U m L-1、8.28 U m L-1,比活力分别为1305.97 U mg-1、28.67 U mg-1。对酶活和比活力都较高的Ec Chi1进行了酶学特征分析,结果显示Ec Chi1的最适p H值为4.0,在p H5.0时最稳定,24 h后残余酶活在70%以上;最适温度为37℃,在40℃以下比较稳定,放置24 h后仍能保持约80%的酶活;共放置20 h后,金属离子Co2+、Fe3+、Zn2+、Cd2+和Cu2+对酶活表现出显著地促进作用。以胶体几丁质为底物,Ec Chi1的Km和Vmax值分别为2.09 mg m L-1和31.15 U m L-1 h-1。2.根据Ec Chi1和Ec Chi2的质谱分析结果,结合脊尾白虾转录组数据库以及RACE技术,得到Ec Chi1、Ec Chi2、Ec Chi3和Ec Chi4四种几丁质酶基因全长c DNA序列。Ec Chi1的开放阅读框（ORF）为1233 bp,编码410个氨基酸,预测分子量（Mw）为46346.44 Da,预测等电点（p I）为4.83;Ec Chi2的ORF为1443 bp,编码480个氨基酸,Mw为53918.87 Da,p I为5.00;Ec Chi3的ORF为1155 bp,编码384个氨基酸,Mw为44442.25 Da,p I为4.76;Ec Chi4的ORF为1170 bp,编码389个氨基酸,Mw为43849.35 Da,p I为4.93。通过SMART在线软件分析四条几丁质酶基因编码蛋白的结构域,发现其推导氨基酸序列中都含有一个信号肽序列和一个GH18家族（Glyco18）结构域;此外,Ec Chi2推导氨基酸序列中还含有一个几丁质结合域（CBD2）。3.利用p DHsp70FLAG-His表达载体和昆虫细胞表达系统对Ec Chi1、Ec Chi2和Ec Chi3进行了体外重组表达,Western blot结果表明重组Ec Chi1、Ec Chi2和Ec Chi3能与His抗体特异性的结合。4.半定量RT-PCR分析发现4个脊尾白虾几丁质酶基因在脊尾白虾不同组织中的表达量较一致:在肝胰腺中表达量最高,在胃中表达量次之,在其他组织中表达量很少;Real-time检测发现4个脊尾白虾几丁质酶基因在不同蜕皮时期的表达模式较一致:在蜕皮间期（C期）和蜕皮期（E期）表达量较高,在其他蜕皮时期表达量很低。因此推测这四种几丁质酶基因可能不参与脊尾白虾的蜕皮过程。体外合成各个几丁质酶基因的双链RNA,注射脊尾白虾进行干扰实验,连续观察9天,发现实验组和对照组脊尾白虾的蜕皮和死亡情况较为一致,即基因沉默并不能影响脊尾白虾的蜕皮周期,因此说明这四种几丁质酶基因可能与脊尾白虾的蜕皮过程无关。另外,随机选取实验组存活和死亡的虾各两尾,在显微镜下观察它们的尾扇形态,发现死亡个体也处于正常的蜕皮时期,说明虾的死亡可能是由于其他原因引起的。