【摘 要】
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该文建立了详细的枯草杆菌代网络,并对多种枯草杆菌的发酵培养进行了代谢通量分析,为进一步的构建基因工程菌工作奠定了基础.同时根据基因工程的原理,从枯草芽孢杆菌168中提
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该文建立了详细的枯草杆菌代网络,并对多种枯草杆菌的发酵培养进行了代谢通量分析,为进一步的构建基因工程菌工作奠定了基础.同时根据基因工程的原理,从枯草芽孢杆菌168中提取染色体总DNA,经EcoRI酶切后,采用电洗脱法回收10kb片断,与pUC19质料连接,转入大肠杆菌TG1中,在含氨苄青霉素,IPTG和X-gal的LB培养基上进行β-半乳糖苷酶系 统筛选,获得728个重组子.对275个白菌落进行质粒快速鉴定,其中23个菌落含有较大质粒.对全部白菌落进行放射性杂交筛选,获得29个杂交斑点.通过对所得阳性重组子质粒快速鉴定,6株所含质粒较大.经过发酵培养测定核黄素产量,除一株低于对照菌TG1(0.346g/l)外,其它5株的产量在0.467-0.570g/l之间,高于对照菌.该实验对电洗脱法回收DNA,MgCl<,2>法和CaCl<,2>法转化方法,以及杂交筛选法,进行了多方面的对比实验,初步建立了适于构建优产核黄素基因工程菌的方法.
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