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目的探讨miR-17-92基因簇在前列腺癌发生发展及对顺铂耐药过程中的作用及潜在机制。方法构建过表达miR-17-92基因簇的前列腺癌DU145细胞株(DU145-17-92),用xCelligence系统动态监测细胞的生长、迁移和侵袭能力并通过划痕实验观察细胞的迁移情况。分别用Ki-67和TUNEL法观察miR-17-92对前列腺癌DU145细胞增殖和凋亡的影响。采用流式细胞术分析miR-17-92对DU145细胞周期的影响。用xCelligence系统动态监测实验组和对照组细胞顺铂处理后的生长情况。采用Western blot法检测两组细胞中凋亡相关蛋白及AKT信号通路相关蛋白的表达,探讨miR-17-92基因簇促进DU145细胞生长的机制;采用Western blot法、凝胶酶谱实验、qRT-PCR法检测相关蛋白和基因的表达以探讨miR-17-92增强DU145细胞的迁移和侵袭能力以及对顺铂耐药性的相关机制。结果xCELLigence系统连续实时动态监测细胞生长72 h。从24 h开始DU145-17-92细胞的生长速度显著快于对照组细胞,且差异具有统计学意义(P<0.05)。对照组细胞24、48、72 h的Ki-67阳性率分别为(56.57±1.68)%、(85.48±0.26)%、(90.85±2.08)%,而相应的时间点DU145-17-92组的Ki-67阳性率分别为(73.64±0.68)%、(93.43±1.23)%、(97.36±0.86)%,后者的增殖活性均高于前者。对照组细胞24、48、72 h凋亡率分别为(6.76±0.09)%、(14.51±0.86)%、(20.73±1.64)%,相应时间点DU145-17-92组细胞凋亡率分别为(1.86±0.15)%、(7.90±0.40)%、(4.92±0.48)%,两组细胞凋亡率均呈时间依赖性增加,且DU145-17-92组细胞凋亡显著低于对照组(P<0.05)。对照组细胞在G0-G1期比例为(65.89±0.47)%、S期比例为(23.14±0.63)%、G2-M期比例为(10.54±0.59)%,DU145-17-92组在G0-G1期比例为(64.61±0.83)%、S期比例为(22.86±0.55)%、G2-M期比例为(11.30±0.61)%,两者无显著统计学差异。Western blot法显示,DU145-17-92组细胞中的促凋亡蛋白BIM及抑癌蛋白PTEN的表达显著低于对照组。过表达miR-17-92促进了AKT中丝氨酸473位点的磷酸化,对308位点的磷酸化没有明显的影响。两组细胞中细胞外信号调节激酶(ERK1/2)的蛋白表达没有显著差异。DU145-17-92细胞中磷酸化的细胞外信号调节激酶(p-ERK1/2)蛋白表达水平显著高于对照组细胞。迁移实验中,x CELLigence系统连续实时动态监测显示,DU145-17-92细胞自2 h起迁移速率快于对照细胞(P<0.01),两者差异呈时间依赖性增加。侵袭实验中,xCELLigence系统监测显示,DU145-17-92细胞侵袭能力强于对照细胞,两者差异从18 h起呈时间依赖性增加,差异有显著统计学意义(P<0.01)。Western blot法和凝胶酶谱实验显示,DU145-17-92细胞中Integrinβ1的蛋白表达水平以及MMP-9的活性显著高于对照细胞。顺铂处理后DU145-17-92细胞的生长速度自12 h起快于对照细胞并呈现顺铂耐药性(P<0.01)。顺铂处理后0、24、48 h各时间点,DU145-17-92细胞和DU145-control细胞中ERK1/2蛋白的表达水平均较高且无差异;DU145-control细胞中ERK1/2的磷酸化水平呈时间依赖性增加,而DU145-17-92细胞中ERK1/2的磷酸化水平并没有受到顺铂的影响,呈现持续高水平磷酸化。DU145-17-92细胞中ERCC1的mRNA以及蛋白表达水平显著高于对照细胞。结论1.过表达miR-17-92基因簇能显著促进DU145细胞的生长,这与细胞增殖能力增强及凋亡减少相关,促凋亡蛋白BIM、抑癌蛋白PTEN表达的下调,AKT及ERK1/2信号通路的活化可能是其潜在原因。2.过表达miR-17-92基因簇增强了DU145细胞的迁移和侵袭能力,其机制与Integrinβ1的表达上调及MMP-9活性增强有关。3.过表达miR-17-92基因簇增强了DU145细胞对顺铂的耐药性,该过程与ERK1/2的磷酸化水平增加和ERCC1的表达水平上调相关。4.miR-17-92基因簇在前列腺癌中扮演了肿瘤癌性蛋白样的角色,可作为判断前列腺癌侵袭、转移以及顺铂耐药的参考指标。