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随着石油资源趋于匮乏和全球环境污染问题的日益加重,各国纷纷开始开发新型能源。燃料乙醇是目前为止最理想的石油替代能源,它的生产方法以发酵为主。菌种的优劣对发酵效果的影响非常大,能够筛选出具有优良性状的菌株及对菌株进行改良,对于降低生产成本,乃至实现酒精的大规模工业化生产,解决能源危机都有着重大意义。本文从自然界多种基质中采样,分离得到69株酵母菌,经TTC法一级筛、耐酒精能力二级筛和产酒精能力三级筛,最终获得4株产酒精能力强且能耐受一定酒精浓度的酵母菌,分别编号为Y-1、Y-2、Y-3和Y-4。根据《The Yeast:a Taxonomic Study》(第三版)提供的鉴定方法,进行了发酵糖试验、同化碳源试验、同化氮源试验、无维生素生长试验、50%葡萄糖-酵母膏生长试验、37℃生长试验、放线酮抗性试验等生理生化试验,并对照模式菌株的生理生化特性,鉴定4株酵母菌分别为:Y-1属于酵母属(Saccharomyces);Y-2为清酒假丝酵母(Candida sake);Y-3、Y-4均为酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)。本研究分别确定了Y-1、Y-2、Y-3、Y-4的最适生长温度、最适生长pH值;研究了温度、pH值、接种量对Y-1、Y-2、Y-3、Y-4生长的影响。结果表明,Y-1、Y-2、Y-3、Y-4的最适生长温度分别为30℃、32℃、30℃、30℃;最适生长pH值分别为5.5、5.0、4.5、4.5;接种量对Y-1、Y-2、Y-3、Y-4的生长影响显著;温度对Y-1的生长影响不显著,对Y-2、Y-3、Y-4的生长影响显著;pH值对Y-1、Y-3、Y-4的生长影响不显著,对Y-2的生长影响显著。用重铬酸钾比色法分别确定了Y-1、Y-2、Y-3、Y-4的最适发酵温度、最适发酵pH值;研究了温度、pH值、接种量对Y-1、Y-2、Y-3、Y-4的发酵曲线的影响。结果表明,Y-1、Y-2、Y-3、Y-4的最适发酵温度分别为32℃、32℃、30℃、30℃;最适发酵pH值分别为5.5、5.0、4.5、4.0;温度对Y-1、Y-2、Y-4的发酵曲线影响显著,对Y-3的发酵曲线影响不显著;pH值对Y-1、Y-2、Y-3的发酵曲线影响显著,对Y-4的发酵曲线影响不显著;接种量对Y-1、Y-2、Y-3、Y-4的发酵曲线影响不显著。针对所获得的高产酒精酵母野生菌株Y-1、Y-2、Y-3、Y-4,研究它们的耐酒精特性。在生长培养基中添加不等量的酒精,测定Y-1、Y-2、Y-3、Y-4在培养10 h后的细胞死亡率,以此方法得出Y-1、Y-2、Y-3、Y-4的酒精耐受度均在20%左右。Y-1、Y-2、Y-3、Y-4在最适发酵温度、最适发酵pH值和2×107个/mL接种量的条件下摇瓶发酵72 h后,最终发酵液中的酒精含量(v/v)分别为10.44%、11.46%、10.92%和10.84%。