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稻瘟病菌(Magnaporthe grisea)引起水稻的重要病害——稻瘟病,了解其致病分子机制对稻瘟病菌的防治意义重大。同时,作为丝状真菌致病机理与分子生物学研究的模式,M.grisea重要功能基因的克隆对了解其它病原真菌与寄主的互作也具有重要意义。M.grisea的侵入前过程,特别是附着胞的分化与形成,已经有很好的研究基础;而侵入后病菌的定殖、菌丝的分化与扩展等过程的机制却不够清楚。 稻瘟病菌附着胞是稻瘟病菌在侵入水稻组织前形成的一种侵染结构,是稻瘟病菌侵染过程中的一个关键环节。了解稻瘟病菌附着胞阶段基因表达的情况对于弄清附着胞的形成、发育和侵入机制具有重要意义。 驱动蛋白Kinesin是美国加州大学的Ronald D.Vale等人在1985年首次在鱿鱼的大轴突的运动中发现,当存在ATP的水解类似物AMP-FNP时,该蛋白可以与微管稳定连接,而当加入ATP或KCl(氯化钾)后,该蛋白又很快与微管分开(Brady S T et al.,1985)。 驱动蛋白最初作为马达沿着微管正极运输膜细胞器,并在神经轴突中,使膜细胞器与微管之间形成交叉桥。在本论文中,它作为附着胞形成过程中运输细胞器的结构蛋白,研究其功能对附着胞的形成具有重要作用。主要研究结果如下: 1.在稻瘟病菌数据库中查询驱动蛋白Kinesin得到5条EST序列,选取E值最小相似性最高的Mag3391745分析,BLAST得到的Kinesin的序列,克隆MgKIN1基因,全长7074bp,结构分析表明MgKIN1基因含五个外显子和三个保守结构域(KIF4、KIF23和MAD),KIF4属于N-5驱动蛋白家族,KIF23属于N-6驱动蛋白家族,MAD为有丝分裂控制点蛋白家族。编码区总长度为5643bp,编码1723个氨基酸残基的多肽。MgKIN1基因编码驱动蛋白的动力域,其含有约330个氨基酸,球状N末端头部域含有ATP结合域和微管结合域,是马达与微管蛋白结合和催化ATP水解的部位,C末端域与轻链相互作用。 2.MgKIN1启动子与绿色荧光蛋白(eGFP)融合表达实验表明,MgKIN1基因在M.grisea的营养菌丝、分生孢子中均表达,其中孢子中的表达量相对较高。