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目的：研究天花粉蛋白（Trichosanthin,TCS）与顺铂（cisplatin,DDP）单药以及联合用药对宫颈癌HeLa细胞和HeLa/DDP细胞生长，增殖和凋亡的影响。确定TCS和DDP联合用药对宫颈癌HeLa细胞的化疗增敏和耐药逆转作用，并初步探讨其作用机制。
方法：将HeLa细胞和HeLa/DDP细胞体外培养，当细胞生长至对数生长期时，将细胞分成：control组，TCS组，DDP组，TCS+DDP联合组做后续实验检测，检测时间均设定为48h。(1)CCK8法分别检测TCS和DDP单药以及联合用药对宫颈癌HeLa细胞和HeLa/DDP细胞的增殖影响并确定有效药物浓度；绘制HeLa细胞和HeLa/DDP细胞的生长曲线；(2)细胞计数后通过Patterson公式DT=t*[lg2/(lgNt-lgN0)]计算HeLa细胞和HeLa/DDP细胞的倍增时间（Td）；(3)用CompuSyn软件分析得出TCS和DDP联合用药的CI值（联合用药指数）；(4)光学显微镜观察宫颈癌HeLa细胞和HeLa/DDP细胞的形态学差异以及药物处理后的细胞的形态变化；(5)细胞划痕实验和Transwell法分别检测各组药物对细胞迁移的影响；(6)流式细胞术检测各组用药对细胞凋亡的影响；(7)蛋白印迹实验检测各组用药对HeLa细胞和HeLa/DDP细胞凋亡相关蛋白表达水平的影响。
结果：(1)TCS和DDP单药均能抑制宫颈癌HeLa细胞和HeLa/DDP细胞的增殖能力（与空白对照组相比，差异有统计学意义），联合用药后，相同浓度的顺铂对宫颈癌HeLa细胞和HeLa/DDP细胞增殖抑制能力更强（与顺铂单药对照组相比，差异有统计学意义）。TCS和DDP分别处理宫颈癌HeLa细胞48h后的IC50值为：0.9922±0.045μg/ml(TCS),3.902±0.821μg/ml(DDP)。与TCS联合用药后DDP的IC50值为1.283±0.364μg/ml(DDP)。TCS和DDP分别处理宫颈癌HeLa/DDP细胞48h的IC50值为0.06±0.004μg/ml(TCS)和8.04±0.15μg/ml(DDP)。与TCS联合用药后DDP对HeLa/DDP细胞的IC50值为2.35±0.18μg/ml(DDP)。(2)HeLa细胞和HeLa/DDP细胞在对数生长期的倍增时间（Td）分别为22.63h±1.02和29.31h±1.01，差异有统计学意义。(3)光镜下观察到HeLa/DDP细胞在脱药前和脱药后的细胞形态无明显变化；(4)TCS和DDP联合用药作用于HeLa细胞和HeLa/DDP细胞48h后的CI值均小于1，且具有浓度依赖性；(5)细胞划痕实验和Transwell法发现与空白对照组及DDP单药组相比联合用药组能明显抑制HeLa细胞和HeLa/DDP细胞迁移；(6)流式细胞术结果表明联合用药组与单药组相比增加了HeLa细胞和HeLa/DDP细胞的凋亡比例；(7)蛋白印迹实验显示联合用药与单药组相比上调了促凋亡蛋白Bax、c-PARP的表达，下调了凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达。
结论：DDP与TCS两药联合具有协同效应。与空白对照组及DDP单药对照组相比，TCS与DDP联合用药能增强其对HeLa细胞和HeLa/DDP细胞增殖和迁移的抑制作用，表明TCS联合DDP具有对宫颈癌HeLa细胞的化疗增敏作用和耐药逆转作用。初步的机制研究表明TCS与DDP联用能通过Bcl-2/Bax-PARP内源性凋亡途径促进HeLa细胞和HeLa/DDP细胞的凋亡，为TCS应用于宫颈癌的临床治疗提供了理论依据。
方法：将HeLa细胞和HeLa/DDP细胞体外培养，当细胞生长至对数生长期时，将细胞分成：control组，TCS组，DDP组，TCS+DDP联合组做后续实验检测，检测时间均设定为48h。(1)CCK8法分别检测TCS和DDP单药以及联合用药对宫颈癌HeLa细胞和HeLa/DDP细胞的增殖影响并确定有效药物浓度；绘制HeLa细胞和HeLa/DDP细胞的生长曲线；(2)细胞计数后通过Patterson公式DT=t*[lg2/(lgNt-lgN0)]计算HeLa细胞和HeLa/DDP细胞的倍增时间（Td）；(3)用CompuSyn软件分析得出TCS和DDP联合用药的CI值（联合用药指数）；(4)光学显微镜观察宫颈癌HeLa细胞和HeLa/DDP细胞的形态学差异以及药物处理后的细胞的形态变化；(5)细胞划痕实验和Transwell法分别检测各组药物对细胞迁移的影响；(6)流式细胞术检测各组用药对细胞凋亡的影响；(7)蛋白印迹实验检测各组用药对HeLa细胞和HeLa/DDP细胞凋亡相关蛋白表达水平的影响。
结果：(1)TCS和DDP单药均能抑制宫颈癌HeLa细胞和HeLa/DDP细胞的增殖能力（与空白对照组相比，差异有统计学意义），联合用药后，相同浓度的顺铂对宫颈癌HeLa细胞和HeLa/DDP细胞增殖抑制能力更强（与顺铂单药对照组相比，差异有统计学意义）。TCS和DDP分别处理宫颈癌HeLa细胞48h后的IC50值为：0.9922±0.045μg/ml(TCS),3.902±0.821μg/ml(DDP)。与TCS联合用药后DDP的IC50值为1.283±0.364μg/ml(DDP)。TCS和DDP分别处理宫颈癌HeLa/DDP细胞48h的IC50值为0.06±0.004μg/ml(TCS)和8.04±0.15μg/ml(DDP)。与TCS联合用药后DDP对HeLa/DDP细胞的IC50值为2.35±0.18μg/ml(DDP)。(2)HeLa细胞和HeLa/DDP细胞在对数生长期的倍增时间（Td）分别为22.63h±1.02和29.31h±1.01，差异有统计学意义。(3)光镜下观察到HeLa/DDP细胞在脱药前和脱药后的细胞形态无明显变化；(4)TCS和DDP联合用药作用于HeLa细胞和HeLa/DDP细胞48h后的CI值均小于1，且具有浓度依赖性；(5)细胞划痕实验和Transwell法发现与空白对照组及DDP单药组相比联合用药组能明显抑制HeLa细胞和HeLa/DDP细胞迁移；(6)流式细胞术结果表明联合用药组与单药组相比增加了HeLa细胞和HeLa/DDP细胞的凋亡比例；(7)蛋白印迹实验显示联合用药与单药组相比上调了促凋亡蛋白Bax、c-PARP的表达，下调了凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达。
结论：DDP与TCS两药联合具有协同效应。与空白对照组及DDP单药对照组相比，TCS与DDP联合用药能增强其对HeLa细胞和HeLa/DDP细胞增殖和迁移的抑制作用，表明TCS联合DDP具有对宫颈癌HeLa细胞的化疗增敏作用和耐药逆转作用。初步的机制研究表明TCS与DDP联用能通过Bcl-2/Bax-PARP内源性凋亡途径促进HeLa细胞和HeLa/DDP细胞的凋亡，为TCS应用于宫颈癌的临床治疗提供了理论依据。