目的本研究采用免疫组织化学方法和免疫电镜方法检测SHBG在GDM组和正常胎盘组织中的表达部位及表达差异,了解胎盘SHBG在GDM时存在的变化趋势,结合孕妇血糖、总胆固醇、甘油三酯等GDM危险因素,探讨胎盘部位的SHBG的表达与GDM的关系,为GDM发病机制的研究提供新的思路与途径。材料与方法一、临床分组免疫组化及电镜标本选取2007年8月至2008年7月经中国医科大学附属盛京医院确诊、住院的足月GDM孕妇30例,并以同期住院正常足月妊娠孕妇30例为对照组,年龄在21～43岁,中位年龄30.71岁,无产科其他合并症及内科合并症,有正常的月经周期。GDM孕妇均行饮食控制或胰岛素治疗。实验组GDM诊断标准依照乐杰主编《妇产科学》第六版。孕妇产前常规测量体重、身高及血压。二、标本收集与处理剖宫产或自然分娩时胎盘娩出后,立即取脐带附着处相对母体面1.0cm×1.0cm×1.0cm大小绒毛组织,冷生理盐水冲洗干净,滤纸吸干后置于10%中性甲醛溶液中固定,常规石蜡包埋。4μm连续组织切片,分别做HE染色和免疫组织化学染色;14μm连续组织切片做免疫电镜。产前取清晨空腹静脉血2ml送我院检验科,测定空腹血糖、总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白-胆固醇、低密度脂蛋白-胆固醇。胎儿娩出后常规测量体重。三、指标检测(一)应用Envision免疫组织化学染色方法观察SHBG在GDM及正常足月孕妇胎盘中是否表达及其表达差异。(二)免疫电镜下定位SHBG的表达部位。四、结果判定光镜下观察SHBG主要在胎盘合体滋养细胞细胞膜及细胞浆中表达。免疫组化结果由两位观察者采用盲法每个病例随机选择5个有代表性的高倍视野,按照阳性细胞数占同类细胞数的比例,进行等级划分。结果采用半定量计分法判定,以染色强度与阳性细胞的百分比的乘积作为半定量标准。即按阳性着色程度评分,0分为无色;1分为黄色;2分为棕黄色;3分为棕褐色(深浅与背景色相对比);着色细胞占计数细胞百分率≤5%为0分,6%～25%为1分,26%～50%为2分,51%～74%为3分,≥75%为4分。将每张切片平均着色程度得分与平均着色细胞百分率得分各自相乘,为其最后得分:0分为阴性(-);1～4分为弱阳性(+);5～8分为中度阳性(++);9～12分为强阳性(+++)。在免疫电镜下观察,合体滋养细胞中出现电子密度高的免疫复合物颗粒,呈小团状或点状分布于细胞内,主要位于细胞表面的微绒毛、细胞膜与细胞浆中,空白对照组即免疫组化过程中PBS代替一抗组,合体滋养细胞无明显免疫反应阳性的电子密度高的免疫复合物颗粒。五、统计分析应用SPSS13.0软件包对所得数据进行分析,两组临床相关资料数据对比除了对孕次、产次的分析,其余样本均应用Student’s T检验的统计方法;孕次、产次(呈非正态分布),胎盘SHBG强度比较均用非参数的Mann-Whitney U检验(两组等级资料秩和检验)的统计学方法;相关性用Spearmanrank相关分析,以P<0.05为差异有统计学意义。结果1、SHBG在GDM及对照组胎盘组织中均表达于胎盘合体滋养细胞的细胞膜和细胞浆中。电镜下观察合体滋养细胞中出现电子密度高的免疫复合物颗粒,呈片状或点状分布于细胞内,主要位于细胞表面微绒毛、细胞膜及细胞浆中。空白对照组即免疫组化过程中PBS代替一抗组,合体滋养细胞未见明显免疫反应阳性的电子密度高的免疫复合物颗粒。2、SHBG在GDM胎盘中的阳性表达率(25/30,83.3%)显著低于对照组正常胎盘阳性表达率(28/30,93.3%)差异有显著的统计学意义(Z=3.541,P<0.01)。3、GDM组胎盘SHBG的表达水平与血糖(r_s=-0.842,P<0.01)呈负相关,对照组胎盘SHBG的表达水平与血糖(r_s=-0.579,P<0.01)呈负相关,两组合并后胎盘SHBG的表达水平与血糖(r_s=-0.758,P<0.01)呈负相关。GDM组与对照组胎盘SHBG表达水平与新生儿体重(GDM组:r_s=0.014,P=0.94;对照组:r_s=0.093,P=0.626)总胆固醇(GDM组:r_s=0.038,P=0.841;对照组:r_s=0.187,P=0.323)甘油三酯(GDM组:r_s=0.144,P=0.488;对照组:r_s=0.105,P=0.580)高密度脂蛋白-胆固醇(GDM组:r_s=0.036,P=0.849;对照组:r_s=0.170,P=0.370)低密度脂蛋白-胆固醇(GDM组:r_s=-0.123,P=0.518;对照组:r_s=0.256,P=0.172)无明显相关性。两组合并后胎盘SHBG表达水平与新生儿体重(r_s=0.101,P=0.440)总胆固醇(r_s=0.122,P=0.352)甘油三酯(r_s=-0.022,P=0.865)高密度脂蛋白-胆固醇(r_s=0.193,P=0.140)低密度脂蛋白-胆固醇(r_s=0.177,P=0.177)均无明显相关性。4、GDM组血糖(5.87±1.53mmol/L)、甘油三酯(4.26±2.15mmol/L)新生儿体重(3852.33±923.61g)均高于对照组血糖(4.39±0.55mmol/L)、甘油三酯(3.05±1.03mmol/L)、新生儿体重(3470.67±445.72g)差异有统计学意义(P<0.01、P<0.01、P<0.05)。GDM组高密度脂蛋白-胆固醇(1.63±0.36mmol/L)、低密度脂蛋白-胆固醇(2.26±0.92mmol/L)均低于对照组高密度脂蛋白-胆固醇(1.91±0.46mmol/L)、低密度脂蛋白-胆固醇(2.87±1.00mmol/L)差异有统计学意义(P<0.05、P<0.05)。结论1、胎盘组织中存在SHBG的表达,光镜下观察主要表达在胎盘合体滋养细胞的细胞膜和细胞浆。电镜下合体滋养细胞中出现电子密度高的颗粒,呈片状或点状分布于细胞内,主要位于合体滋养细胞表面微绒毛、细胞膜及细胞浆中,与光镜下观察结果相一致。2、GDM组胎盘组织SHBG表达水平低于对照组,可能提示SHBG的表达同样受到GDM病理状态的影响。3、胎盘部位的SHBG表达与血糖呈负相关,可能提示我们:胎盘SHBG在妊娠期可能对血糖的调控具有一定的作用,而在GDM这种作用减弱,由此推测可能与妊娠期胰岛素抵抗有一定的关系。4、GDM组甘油三酯高于对照组而高密度脂蛋白-胆固醇、低密度脂蛋白-胆固醇低于对照组推测可能与GDM患者脂代率高和脂代谢紊乱有关。