香灰菌是银耳的伴生真菌,也是一种非致病真菌,在其生长过程中会分泌大量的黑色素,其黑色素具有抗氧化、抗辐射、抑菌、抗病毒等功效,因而在食品、医疗、农业及化妆品工业具有潜在的应用价值。目前关于香灰菌黑色素的研究很少,在分子水平上的研究未见报道。漆酶是一种含有铜离子的酶,存在于许多子囊菌和担子菌中,是真菌多聚二羟萘（1,8-Dihydroxynaphthalene,DHN）黑色素合成途径的氧化酶。研究香灰菌黑色素合成途径中漆酶基因的功能,为从分子水平上调节黑色素产量提供理论依据。本研究以香灰菌为材料克隆了3-磷酸甘油醛脱氢酶（Glyceraldehyde-3-phosphatede hydrogenase,GPD）启动子,建立根癌农杆菌介导的遗传转化体系。克隆香灰菌漆酶基因,构建了香灰菌漆酶基因干涉载体并进行了遗传转化,研究了不同转化子菌株的生长速度和黑色素分泌情况。主要研究结果如下:（1）通过PCR技术克隆了香灰菌gpd基因以及其基因上游约1000 bp序列,使用生物信息学软件分析发现gpd基因上游区域具有典型启动子的特征,不仅有一个高分值的转录起始位点,还含有增强子CAAT-box、启动核心元件TATA-box、CT-rich以及一些顺式作用元件。将gpd基因上游序列与增强型绿色荧光蛋白基因（egfp）和潮霉素基因（hph）连接构建成融合表达载体p CAMBIA1302-hgpd-egfp-hph,构建了根癌农杆菌介导的香灰菌遗传转化体系。（2）根据漆酶基因铜离子结合域保守序列,设计简并引物扩增出香灰菌漆酶基因保守区域,然后利用热不对称交错PCR（Thermal asymmetric interlaced PCR,TAIL-PCR）扩增出香灰菌漆酶基因全长,命名为Hy-lac-1,该基因全长2224 bp,有1611 bp开放阅读框,编码536个氨基酸。对Hy-lac-1编码的蛋白质进行生物信息学分析发现,该漆酶蛋白质具有三个典型的漆酶Cupredoxin superfamily结构域,属Cupredoxin超家族中的成员,具有分布均匀的疏水和亲水结构,二级结构和三级结构分析发现也存在典型漆酶的三段螺旋结构。（3）将Hy-lac-1保守片段与香灰菌gpd启动子和Ca MV35S启动子连接进p CAMBIA1302-hgpd-egfp-hph构建Hy-lac-1基因干涉（RNA interference,RNAi）载体,利用根癌农杆菌转化香灰菌丝体,共获得四株转化子,编号分别为5、10、12、56,利用荧光定量PCR（Quantitative real-time PCR,q RT-PCR）测定不同转化子菌株及野生型菌株漆酶基因的表达量,并测定不同菌株的生长速度及黑色素产量,发现转化子的生长速度减缓,但是不同菌株受到Hy-lac-1表达量影响的程度不同。黑色素产量随着Hy-lac-1表达量的降低而降低,表明Hy-lac-1对香灰菌黑色素的合成具有正调节作用。