重组腺病毒Ad-rIL-10转导骨髓基质细胞对脓毒症保护作用的研究(二)——重组腺病毒Ad-rIL-10质粒的构建

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  本文拟构建鼠IL-10腺病毒载体的重组质粒,转染骨髓基质细胞,使宿主体内能持续产生一定量的IL-10,维持较高的、有效的血药浓度,上调IL-10的表达,下调TNF-α的水平,从而达到对脓毒症的保护作用。国外已有资料显示,Takakuwa[7]报道采用腺病毒载体介导的方法将鼠IL-10的目的基因经腹腔内注射转移至体内,腹腔组织IL-10呈高表达,同时动物未出现竖毛、腹泻、肺或脑出血等副作用。这说明腺病毒载体介导的基因转移的方法是有效和安全的。   本文揭示了重组质粒Ad-rIL-10构建,用细菌同源重组法构建了pAd-rIL-10重组质粒,为下一步实验奠定基础。已成功扩增、大量抽提Ad-rIL-10质粒DNA,为下一步进行重组体腺病毒的包装、扩增和纯化提供了结构基础。论述了用高效化学转化法加速了重组质粒制备的速度和效率的作用。
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