第一部分Mpp+诱导PC12细胞凋亡的帕金森病细胞模型的建立应用3-(4 , 5-二甲基噻唑-2)-2 , 5-二苯基四氮唑溴盐法(3-(4,5)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-3,5-di- phenytetrazoliumromide, MTT)法测定暴露于不同MPP~+浓度下PC12细胞存活率的变化,结果显示随着MPP~+浓度的升高,PC12细胞存活率逐渐降低。应用Western免疫印迹(Western Blot)法检测MPP~+处理的不同时间段,凋亡相关蛋白—活化的caspase-3的表达变化,结果显示,在MPP~+处理4h时,活化的caspase-3的表达到达高峰。应用Hoechst33258染色法以及以上实验得出的实验条件处理细胞,可观察到MPP~+诱导PC12细胞的凋亡。第二部分IGF-1对Mpp+诱导PC12细胞凋亡的保护作用以及其机制应用MTT法测定予以不同浓度IGF-1保护后暴露MPP~+的PC12细胞存活率的变化,结果显示IGF-1可保护PC12细胞,使其存活率升高。应用Hoechst33258染色法以及AO-EB染色法观察到IGF-1抑制MPP~+诱导的PC12细胞凋亡。应用Western免疫印迹(Western Blot)法检测加入IGF-1保护后的MPP~+处理的不同时间段,GSK-3β和AKT以及其磷酸化蛋白表达变化,结果显示,在IGF-1和MPP~+共处理后,GSK-3β和AKT的磷酸化蛋白的表达有基本一致的改变。为进一步证实GSK-3β和AKT参与到IGF-1的保护机制当中,进一步加入GSK-3β和AKT特异性抑制剂后发现,AKT特异性抑制剂可抑制IGF-1的保护作用,GSK-3β的特异性抑制剂可对MPP~+诱导的PC12细胞凋亡起到保护作用。