【摘 要】
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目的:观察携带人胰岛素样生长因子-I 基因的重组腺病毒(Adenovirus-human insulin like growth factor-I transgene construct,Ad-hIGF-I)体外转导培养关节软骨细胞后对其生
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目的:观察携带人胰岛素样生长因子-I 基因的重组腺病毒(Adenovirus-human insulin like growth factor-I transgene construct,Ad-hIGF-I)体外转导培养关节软骨细胞后对其生物学特性的影响,并评价 IGF-I 基因在关节软骨细胞内的稳定表达和对软骨细胞去分化的抑制作用,以及促进软骨细胞外基质成分生成的能力。 方法:取 3 周龄健康新西兰兔双侧膝关节及股骨头软骨,以机械分离与酶阶段消化分离相结合的方法获取软骨细胞,高糖型 DMEM 培养基中培养细胞,每 2-3 天换液一次,待细胞达 80%—90%融合时,消化传代,并以 500 感染复数(multiplicities of infection,MOI)的 Ad-hIGF-I转导第一代软骨细胞,将受测细胞随机分为转导组与未转导组,逐日于倒置显微镜下观察和比较细胞形态,并行四唑盐比色法绘制细胞生长曲线,分析细胞分化与生长能力;采用组织学染色、免疫组化、样本碱水解法、阿利新蓝法和 ELISA 的方法,分别对转导组和未转导组的第 1、3、5、7 代细胞进行检测,比较目的基因的稳定表达以及胶原和多糖生物合成的差异。 结果:原代培养兔关节软骨细胞约 48—72h 贴壁,细胞形态多为小的梭形、纺锤形或三角形。传代细胞贴壁时间缩短,一般自 12h 即已开始贴壁,随传代次数增加,未转导组细胞形态逐渐向长梭形发展,
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