【摘 要】
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研究者发现根据患者体内半胱氨酸(Cysteine,Cys)的含量可以跟踪一些疾病的产生和发展,同时可以通过控制患者体内的Cys含量来治愈部分疾病。因此,人类体内Cys的定量检测受到研究者的广泛关注。在众多检测Cys的方法中,光学检测法因具有高灵敏度、强特异性等优势受到研究者的青睐。本文通过光学检测法合成了两个新型探针,实现了对Cys的特异性检测。本文合成了发橙黄光的荧光团CO(7-羟基香豆素-4-
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研究者发现根据患者体内半胱氨酸(Cysteine,Cys)的含量可以跟踪一些疾病的产生和发展,同时可以通过控制患者体内的Cys含量来治愈部分疾病。因此,人类体内Cys的定量检测受到研究者的广泛关注。在众多检测Cys的方法中,光学检测法因具有高灵敏度、强特异性等优势受到研究者的青睐。本文通过光学检测法合成了两个新型探针,实现了对Cys的特异性检测。本文合成了发橙黄光的荧光团CO(7-羟基香豆素-4-羧酸乙酯)和发红光的荧光团LA(10-(二乙氨基)-3-羟基-5,6-二氢苯并[c]呫吨-12-鎓),分别连接丙烯酸酯作为识别基团,以羟基的保护/去保护策略为背景合成了具有优良性质的荧光探针COAC(7-乙酯(丁烷-1,3-二亚乙基三胺-2-酰氧基2-氧代-2h-苯并吡喃-4-羧酸盐))和LAAC(3-(丙烯酰氧基)-10-(二乙氨基)-5,6-二氢苯并[c]呫吨-12-鎓)。测定荧光团的基本性质,确定其p Ka、溶剂、量子产率,发现荧光团具有良好的发光性能和稳定性,这为探针的荧光检测提供了良好的先决条件。测定探针的基础性质,进行了荧光滴定实验、反应时间实验、p H效应实验、选择性竞争性实验等。发现两个探针与Cys反应时荧光强度均有显著增强,说明探针具有高灵敏度,强响应性。p H实验测试结果显示两个探针在生物体内多变的p H环境下,仍具有良好的检测能力。在选择性竞争性实验中,发现生物体内的其他氨基酸、生物硫醇对探针的检测无干扰,说明探针具有特异性检测Cys的优势。测定探针的生物成像能力,分别进行了细胞毒性、细胞时间、细胞浓度等实验。实验结果显示,探针COAC的细胞毒性研究中细胞平均活性达到了85%,同时探针在细胞内的停留时间为30 min,探针LAAC较COAC具有更优良的生物检测性能。过量的高半胱氨酸(Homocysteine,Hcy)和谷胱甘肽(Glutathione,GSH)不会对两个探针特异性检测Cys造成干扰,这说明了两个探针不论在细胞体内还是体外均有良好的选择性。通过双光子截面实验发现探针LAAC具有双光子性能,在共聚焦实验中发现LAAC是一种可以定量检测核仁和溶酶体中Cys的可视化传感器,这对未来细胞核仁的跟踪定位具有重要意义。
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