【摘 要】
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目的筛选MC3T3-E1细胞成骨分化过程中表达上调的lncRNA,为进一步研究lncRNA对成骨分化的调控打下基础。方法首先培养MC3T3-E1细胞并诱导其分化,随之提取MC3T3-E1成骨分化过程
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目的筛选MC3T3-E1细胞成骨分化过程中表达上调的lncRNA,为进一步研究lncRNA对成骨分化的调控打下基础。方法首先培养MC3T3-E1细胞并诱导其分化,随之提取MC3T3-E1成骨分化过程中的总RNA并予以纯化,合成cDNA并行PCR扩增,继之合成荧光标记cRNA并行PCR扩增,纯化荧光标记cRNA并测量其浓度,将cRNA片段化并和芯片杂交,获得microarray数据后将数据进行标准化,筛选成骨分化过程中表达上调的lncRN。继之qRT-PCR验证MC3T3-E1成骨分化过程中表达上调的lncRNA。然后siRNA干扰lncRNA104表达并qRT-PCR测定其抑制效率。最后测定lncRNA104表达降低时OC浓度和ALP活性。结果1.筛选出19个MC3T3-E1细胞成骨分化过程中表达上调lncRNAs。2.qRT-PCR证实MC3T3-E1细胞成骨分化过程lncRNA642、 lncRNA160和lncRNA104表达均上调,与芯片结果基本一致。3.qRT-PCR显示siRNAb处理MC3T3-E1细胞48小时后lncRNA104表达抑制率达到70%。4.抑制lncRNA104表达致OC分泌和ALP活性降低。结论1.鉴定出小鼠成骨细胞分化过程中表达上调IncRNA。2.1ncRNA104促进小鼠成骨细胞分化。
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