中药复方排气颗粒的制备及其药效作用机制研究

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排气方是由肉苁蓉、厚朴、木香、枳壳、莱菔子、火麻仁、桔梗七味中药组成的中药复方,临床主要用于加快术后患者胃肠道功能的恢复,加快患者排气、排便,预防术后肠梗阻的发生,疗效良好。目的:排气方在我院临床使用一直以汤剂为主,因汤剂存在不易保存、携带不便和不适合工业大生产等缺点,所以本实验将在前期实验基础上,对我院中药复方排气汤剂进行制剂开发,将其研制成无糖颗粒。方法:首先对药材提取工艺和制剂成型工艺进行工艺考察,并制定颗粒剂的质量标准;同时对中药复方排气汤的药效学进行考察,最后采用网络药理学技术,对中药复方排气颗粒治疗术后肠梗阻的机制进行预测,以期为中药复方排气颗粒的临床应用提供更充分的理论基础。(一)以新橙皮苷、厚朴酚含量和浸膏得率为检测指标,以水加热回流为药材提取方式,采用单因素实验和L9(3~4)正交实验,对提取工艺进行考察,筛选出最佳提取工艺。(二)以成型性、吸湿性和流动性为考察指标,先对辅料进行考察,初步筛选出无糖颗粒的最优辅料;对于颗粒剂的浸膏和辅料比、润湿剂浓度、烘干温度的考察,采用单因素实验和L9(3~4)正交实验,对制剂成型工艺进行考察,筛选出最佳制剂工艺。同时还对颗粒的溶化性、堆密度和临界相对湿度进行考察,最后以优选工艺进行中试放大实验。(三)采用薄层色谱法对中药复方排气颗粒中枳壳药材进行鉴别,使用枳壳对照药材和新橙皮苷、柚皮苷对照品为参照,以三氯甲烷-甲醇-水(13∶6∶2)下层溶液为展开剂,3%三氯化铝乙醇溶液为显色剂,在105℃加热约5分钟,置紫外光灯(365nm)下检视;对厚朴药材进行薄层鉴别,以厚朴对照药材与厚朴酚、和厚朴酚对照品为参照,以石油醚-乙酸乙酯-甲酸(85∶25∶2)为展开剂,5%香草醛硫酸溶液为显色剂,在105℃加热至斑点显色清晰;对肉苁蓉药材进行薄层鉴别,以肉苁蓉对照药材和松果菊苷、毛蕊花糖苷对照品为参照,使用聚酰胺薄层板,以甲醇-醋酸-水(2∶1∶7)为展开剂,置紫外光灯(365nm)下检视。并按照《中国药典》四部通则颗粒剂项下要求对颗粒的性状、粒度、干燥失重、溶化性、水分等进行检测,并对中试样品进行检测,以市售包装为每袋10g,制定质量标准的最低限度,作为质量控制标准。(四)采用经典的术后肠梗阻造模方法,使用C57BL/6J雄性小鼠建立术后肠梗阻模型,分为假手术组、模型组、莫沙必利组(阳性药组)、排气汤组。除假手术组打开腹腔后不对小鼠小肠进行刺激操作外,其余各组均按照标准化操作刺激小鼠小肠,建立术后肠梗阻模型。排气汤组灌胃排气汤药液,莫沙必利组灌胃枸橼酸莫沙必利药液,假手术组和模型组灌胃同体积的生理盐水。对各个指标进行检测,完成对中药复方排气颗粒的药效学考察。(五)采用网络药理学技术,利用TCMSP数据库,检索出排气方的主要化学成分及预测的相应靶点,利用Cytoscape3.7.2构建活性成分-靶点网络图;在OMIM和Gene Cards数据库中检索出术后肠梗阻(postoperative ileus,POI)的疾病靶点,并与排气方靶点进行交叉,得出关键靶标,利用STRING数据库构建蛋白-蛋白相互作用(PPI)网络。最后利用DAVID数据库对关键靶点进行GO功能和KEGG信号通路富集分析。结果:(一)筛选出的最佳水提工艺为:10倍体积的水加热回流提取3次,每次30min,并且该工艺经过验证确定其稳定、可靠。(二)筛选出的最佳制剂工艺为:以糊精为辅料,在浸膏相对密度为1.38(60℃)左右时,浸膏和辅料比为1:3,以70%乙醇为润湿剂,70℃烘干为最佳制剂工艺。后制成三批中试颗粒,三批颗粒的综合评分RSD%为0.42%。(三)在三批颗粒的薄层色谱中,在枳壳、厚朴、肉苁蓉对照品或对照药材色谱相应的位置上,均显示相同的颜色和荧光斑点,且阴性对照无干扰。中药复方排气颗粒中每袋(10g)至少含新橙皮苷的质量标准为90mg,厚朴酚的质量标准为1.2mg。(四)通过对排气汤的药效考察,发现本复方可以有效降低术后肠梗阻造成的胃肠道功能障碍,同时减轻胃肠道炎症反应,加快胃肠功能的恢复。(五)经过筛选,共搜集到排气方中潜在的有效成分23个,其中肉苁蓉6个,厚朴8个,枳壳4个,木香5个,删除重复目标后获得的作用靶点为234个,其中61个为排气方治疗POI的关键靶点。PPI网络分析得到18个核心靶点,对这些核心靶点进行GO功能富集分析(P<0.01)和GO KEGG信号通路富集分析,得到排气方治疗POI的潜在靶点和通路。结论:(一)优选出中药复方排气颗粒的提取和制剂工艺,并且中试放大生产三批,建立了稳定可靠的制剂生产工艺流程;同时对颗粒剂的质量标准进行研究,建立了定性鉴别、含量测定、方法学考察等项目标准,为颗粒剂的质量保障提供了依据,为后期医院制剂的申请提供了可靠的基础。(二)对排气汤进行了药效学考察,验证了其治疗术后肠梗阻的药效作用;同时网络药理学分析结果表明,排气颗粒治疗术后肠梗阻通过多成分、多靶点、多通路协同作用而发挥治疗作用。
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