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研究目的乳腺增生病是女性发病率最高的疾病之一,其发病多与以下丘脑—垂体-肾上腺轴(hypothalamic-pituitary-adrenal axis,HPA轴)及下丘脑-垂体-卵巢轴(hypothalamic-pituitary-ovary axis, HPO轴)为主的内分泌激素紊乱有关,本课题探讨临床最常用治疗乳腺增生病的方法疏肝法和补肾法及肝肾同治法的治疗机制,进一步研究其与HPA轴及HPO轴的相关性。研究方法(1)分组和造模：70只Wistar大鼠随机分为6组,正常组,15只；模型组,15只；西药组(三苯氧胺),10只；疏肝组(柴胡疏肝散组),10只；补肾组(二仙汤组),10只；补肾疏肝组(柴胡疏肝散+二仙汤组),10只。除正常组大鼠外,各组大鼠通过肌肉注射苯甲酸雌二醇和黄体酮的方法,复制出大鼠乳腺增生模型。(2)给药：正常组和模型组灌服生理盐水2ml/次,每日一次,其余各组按文献计算大鼠的等效剂量进行灌胃,2ml/次,每日一次,连续28天。(3)指标检测：用药第28天后断头处死大鼠,收集标本进行指标检测。①计算乳腺体积：用游标卡尺测量大鼠右侧第二个乳房直径及乳头高度计算乳房体积。②病理观察：大鼠乳腺组织HE染色,镜下观察结果。③检测性激素水平：采用放免法和比色法对大鼠的血清中的雌二醇(estradiol,E2)、孕酮(progesterone, P)、垂体卵泡刺激素(follicle stimulating hormone, FSH)、垂体黄体生成素(luteotrophic hormone, LH)、皮质酮(corticosterone, CORT);血浆中的促肾上腺皮质激素(Adrenocorticotropic Hormone, ACTH);下丘脑中的促性腺激素释放激素(gonadotropin-releasing hormone, GnRH)、促肾上腺皮质激素释放激素(Corticotropin-Releasing Hormone, CRH)分别进行检测。④NCA(PolyClonal Antibody, PNCA)检测：二步免疫组化法测增殖细胞核抗原。研究结果①大鼠乳腺的体积：相对于模型组,二仙汤组和柴胡疏肝散+二仙汤组大鼠乳腺体积的数值偏低,差异显著,有统计学意义。②病理观察：柴胡疏肝组乳腺小叶中腺泡数目较模型组相对减少,分泌现象仍可见,但较模型组好转。二仙汤组较模型组乳腺小叶腺泡数目明显减少,分泌现象少见,叶间导管及大导管腺上皮可见增生,未见明显筛状结构。柴胡疏肝散+二仙汤组乳腺小叶中腺泡数目减少最为明显,分泌现象偶见,叶间导管腺上皮多为单层结构,大导管腺上皮偶见复层增生,导管周围脂肪包裹常见。③检测性激素水平：模型组CRH、LH、GnRH均显著高于正常组；与模型组比较,柴胡疏肝散对CRH有升高作用,对LH和CORT有降低作用；二仙汤对LH有降低作用,对CORT有升高作用；柴胡疏肝散联合二仙汤对ACTH和LH有降低作用；三苯氧胺对CRH和ACTH有升高作用,对LH有降低作用。④PNCA检测：柴胡疏肝组与模型组之间的阳性细胞数没有差异,二仙汤组与柴胡疏肝散+二仙汤组的阳性细胞数明显低于模型组,而且柴胡疏肝散+二仙汤组的阳性率最低。研究结论1.外源性雌、孕激素联合25天的造模方法很成功,相对于30天的造模方法,可以缩短造模周期。2.和疏肝法相比,补肾法在改善乳腺增生病形态学上具有优势。3.和补肾法相比,疏肝法在调节性激素水平上具有优势,但并非单纯减低性激素水平,而是对激素水平比例有改善,体现了中医治疗的多元性优势。4.肝肾同治增效的核心机制可能不在于协同缓解腺体厚度、改善病理形态等方面,两者更可能是在适应症不同上各有偏向。疏肝法可能更适用于以疼痛或情绪异常为主的患者,而补肾法适用于病程较长,病情严重的患者。