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目的：克隆细粒棘球绦虫AgB8/3(EgAgB8/3)抗原基因编码片段，构建有自切功能的原核表达载体pTWIN1-EgAgB8/3，并进行表达条件的优化和初步纯化，获得较纯的EgAgB8/3重组抗原(rEgAgB8/3)，制备抗rEgAgB8/3抗原的多克隆抗体，通过ELISA-双抗夹心法检测棘球绦虫感染犬粪EgAgB8/3天然抗原并对其诊断价值进行评估。方法：根据Genebank登陆号(AF362442)下载目的基因核酸序列，利用DNAman软件设计引物，以实验室库存的pET32a-EgAgB8/3重组载体为模板，对EgAgB8/3编码分泌型多肽片段的核酸序列进行PCR扩增，构建pEASY-T1-EgAgB8/3重组质粒，经PCR、酶切及测序鉴定后，将EgAgB8/3抗原基因片段定向连入原核表达质粒pTWIN1(+)上，将重组子pTWIN1-EgAgB8/3转化入E.coli DH5α，根据选择标记的氨苄青霉素抗性基因筛选到阳性克隆后将pTWIN1-EgAgB8/3重组质粒转染至大肠杆菌E.coli ER2566，IPTG诱导表达CBD-intein1-EgAgB8/3融合蛋白，通过几丁质柱结合CBD结合域利用融合蛋白自我剪切特点裂解纯化得到目的蛋白(rEgAgB8/3)，用SDS-PAGE电泳和western blot分析鉴定融合蛋白与目的蛋白rEgAgB8/3的表达量和纯度。目的蛋白rEgAgB8/3免疫动物后收集血清，采用硫酸铵沉淀法纯化免疫血清总IgG，部分总IgG用过碘酸钠法进行标记，以未标记的总IgG包被抗体，标记的IgG为最终底物，通过ELISA-双抗夹心法检测棘球绦虫感染犬粪抗原。结果：成功克隆获得EgAgB8/3基因目的片段并构建具有蛋白自剪切功能的重组表达载体pTWIN1-EgAgB8/3，并鉴定其表达的融合蛋白主要以可溶形式存在；构建的重组载体中融合标签的几丁质结合域(CBD)和内含肽(intein1)分别使亲和层析纯化和融合标签自剪切一步完成得到高纯度的目的蛋白，免疫动物后获得高效价多克隆抗体，用ELISA-双抗夹心法对棘球绦虫感染犬粪特异性抗原检测的灵敏度和特异度分别为93.1%和97.6%。结论：成功的构建重组表达载体pTWIN1-EgAgB8/3，获得高表达融合蛋白CBD-intein1-EgAgB8/3，并经简单后续处理即可获得含极少任何额外氨基酸的可溶性目的蛋白rEgAgB8/3，尽可能保证了其原有的结构和活性，且免疫动物后制备的多克隆抗体用于ELISA-双抗夹心法检测犬粪EgAgB8/3天然抗原获得的很高的敏感性和特异性，克服了融合表达蛋白质带来的非特异性交叉反应，肯定了选择EgAgB8/3为检测犬感染E.g的粪抗原的意义，为rEgAgB8/3蛋白ELISA-双抗夹心法粪抗原检测棘球绦虫感染犬快速诊断试剂盒的制备提供了科学依据，此方法的稳定性和推广实用性还需用大量的流行病学调查资料进一步证实。