毛细管电泳检测多种靶DNA及小分子化合物

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本工作将毛细管电泳-电化学检测技术引入靶DNA分析中,将辣根过氧化物酶(HRP)催化过氧化氢(H2O2)氧化邻氨基酚的酶促反应与其氧化产物的电极还原相偶合,利用毛细管电泳电化学检测技术间接检测邻氨基酚-H2O2-辣根过氧化物酶(HRP)体系中的HRP含量。在此基础上引入生物素-亲合素系统,通过毛细管电泳安培法进行分离检测21个、39个、80个碱基的靶DNA。第一章为绪论,介绍了毛细管电泳技术的发展和研究现状以及本课题的意义;第二章介绍了毛细管电泳电化学间接检测HRP的情况;第三章用毛细管电泳电化学检测21个、39个、80个碱基的靶DNA;第四章用毛细管电泳电化学检测小分子化合物腺苷;第五章用毛细管电泳电化学发光检测腺苷。在最佳反应条件下,测定游离HRP检测限为1.09×10-12 mol·L-1 (S/N = 3),线性范围为2.3×10-12 3.5×10-10 mol·L-1。利用此方法成功应用于检测21个碱基的靶DNA ,测定线性范围为4.0×10-11-2.0×10-9 mol·L-1,检测限为1.2×10-11 mol·L-1 (S/N = 3)。对1.0×10-10 mol·L-1的21个碱基ssDNA进行7次平行测定,相对偏差为7.2 %。在实验条件最优化的情况下,可以达到通过毛细管电泳安培法对21个碱基的单链DNA进行分离检测。利用此方法成功应用于检测39个碱基的靶DNA ,测定线性范围为5.0×10-11-1.2×10-9 mol·L-1,检测限为2.4×10-11 mol·L-1 (S/N = 3)。对1.0×10-10 mol·L-1的39个碱基ssDNA进行7次平行测定,相对偏差为6.4 %。在实验条件最优化的情况下,可以达到通过毛细管电泳安培法对39个碱基的单链DNA进行分离检测。利用此方法成功应用于检测80个碱基的靶DNA ,测定线性范围为5.0×10-11-1.0×10-9 mol·L-1,检测限为3.0×10-11 mol·L-1 (S/N = 3)。对1.0×10-10 mol·L-1的80个碱基ssDNA进行7次平行测定,相对偏差为6.9 %。在实验条件最优化的情况下,可以达到通过毛细管电泳安培法对80个碱基的单链DNA进行分离检测。利用此方法应用于同时检测21个、39个、80个碱基的单链DNA,成功实现了同时进行多个单链DNA的分离检测。利用毛细管电泳电化学方法成功应用于检测小分子化合物腺苷,通过实验,本文得出运用2.5×10-2 mol·L-1 pH 8.6的Tris缓冲液,10 kV作为分离电压,12 kV和5s作为进样电压和进样时间可以对腺苷进行分离。利用毛细管电泳电化学发光法成功应用于检测腺苷,通过实验,本文得出运用0.04 mol·L-1 pH 7.40的PBS缓冲液,12 kV作为分离电压,15 kV和5 s作为进样电压和进样时间,1.2 V作为检测电势可以对腺苷进行分离,灵敏度达到1×10-8 mol·L-1
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