背景与目的食管癌是全球常见的恶性肿瘤之一,有较高的发病率和死亡率。近年来虽然对食管癌的治疗水平有了一定的提高,但食管癌患者的预后仍然很差,五年生存率较低。研究显示食管癌的发病机理是多基因、多步骤、多信号传导通路异常参与的共同结果,因此深入探索食管癌发生、发展的分子机制,并在此基础上寻找新的治疗标志物成为当前的研究热点。既往的研究报道了食管癌发生、发展的分子机制与原癌基因的激活和抑癌基因的失活密切相关。随着测序技术的发展,越来越多的人关注非编码RNA的研究。长链非编码RNA(Long non-coding RNA,lncRNA)是一类转录本大于200个核苷酸的非编码RNA(non-coding RNA,ncRNA)分子,缺少有效的开放阅读框,几乎没有蛋白编码能力,但在人类基因组中有着重要调控作用的RNA分子。研究证实lncRNA可通过多种调控方式调节基因的表达,如表观遗传修饰,转录干扰和转录激活等方式,在多种生物学过程中发挥重要的调节作用,导致肿瘤的进展和转移。研究发现,lncRNA的异常表达与多种肿瘤的发生发展密切相关,可以作为肿瘤的促进或抑制因子。因此,寻找肿瘤特异的lncRNA分子,揭示它在肿瘤发展中的潜在作用机制,发现其潜在的诊断和治疗靶点,具有十分重要的临床意义和价值。LncRNA MNX1-AS1(Motor neuron and pancreas homeobox 1-antisense RNA1)是长度为992 bp的长链非编码RNA,位于7号染色体上。最近的研究证实,MNX1-AS1在结肠癌组织中显著上调,通过调节miR-218-5p/SEC61A1轴促进结肠癌的进展。此外,MNX1-AS1在乳腺癌中表达上调,通过激活AKT/mTOR通路来诱导上皮-间充质的转变。这些研究表明MNX1-AS1可以在肿瘤进展中发挥癌基因的作用,然而MNX1-AS1在食管癌中的作用与机制尚不清楚,需要进一步的研究阐明。在本研究中,通过检测45例ESCC及相应癌旁组织中MNX1-AS1的表达水平,分析MNX1-AS1表达水平与ESCC患者临床病理因素之间的关系。通过构建MNX1-AS1敲低的ESCC细胞模型,检测MNX1-AS1对食管鳞癌细胞增殖、周期、凋亡、迁移和侵袭等生物学功能的作用。此外,初步探讨了 MNX1-AS1在ESCC中发挥作用的分子机制,为ESCC的发生发展提供理论依据。方法1采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测45对ESCC患者癌组织及其配对的癌旁组织中MNX1-AS1的表达水平,并分析MNX1-AS1与临床各项病理因素之间的关系。2利用siRNA靶向敲除ESCC细胞系KYSE30和KYSE150中MNX1-AS1的表达,通过WST-1增殖实验,细胞周期实验、细胞凋亡实验和Transwell迁移、侵袭实验,探讨MNX1-AS1的敲低对食管鳞癌细胞生物学功能的影响。3用生物信息学软件预测MNX1-AS1下游的靶基因miR-34a,qRT-PCR检测其在ESCC组织、siRNA转染后ESCC细胞系中的mRNA表达水平,通过迁移实验分析miR-34a与MNX1-AS1对食管鳞癌细胞生物学功能的影响。4分析miR-34a发挥作用可能的下游靶基因是SIRT1,qRT-PCR检测其在靶向敲减miR-34a、MNX1-AS1后在ESCC细胞系中的mRNA表达水平,探讨MNX1-AS1在食管鳞癌中发挥作用的分子机制。结果1 MNX1-AS1在ESCC癌组织的表达水平高于与其匹配的癌旁组织,此外,MNX1-AS1的表达水平与ESCC患者的淋巴结转移有关(P<0.05)。2靶向敲低MNX1-AS1后,ESCC细胞的增殖、迁移和侵袭能力均下降(P<0.05),MNX1-AS1可以调节细胞周期和细胞凋亡,敲低MNX1-AS1后,G1期的细胞数目增多,而S期的细胞数目减少,此外,细胞的凋亡数目增多(P<0.05)。3 miR-34a在ESCC组织中的表达下调(P<0.05),且miR-34a的表达与MNX1-AS1的表达呈负相关(R2=0.6419),靶向敲低MNX1-AS1后,miR-34a的表达水平显著升高(P<0.05)。迁移实验表明抑制miR-34a表达可以部分逆转MNX1-AS1对ESCC细胞的迁移能力(P<0.05)。4 SIRT1在ESCC组织的表达上调(P<0.05),靶向敲低MNX1-AS1后,SIRT1的表达水平降低(P<0.05),敲低miR-34a后,SIRT1的表达水平显著升高(P<0.05)。结论1 MNX1-AS1在ESCC癌组织的表达水平升高,且与ESCC患者的淋巴结转移有关。2靶向敲低MNX1-AS1后,ESCC细胞的增殖、迁移和侵袭能力均下降且MNX1-AS1可以调节细胞周期和细胞凋亡,MNX1-AS1促进ESCC进展可能是通过调控miR-34a/SIRT1轴这一途径来实现的。