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γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid,GABA)为脊椎动物大脑中的主要抑制性神经递质,通过离子型受体GABAA和GABAC以及代谢型受体GABAB发挥其功能。其中,代谢型GABAB受体属于GPCR家族,通过G蛋白及其下游效应分子调节细胞功能。GABAB受体在大脑中分布广泛,其功能异常与多种神经性及精神性疾病相关,包括癫痫、精神分裂症和药物滥用等。因此,GABAB受体已经成为神经系统疾病中的一个关键靶点。研究发现,GABAB受体可以调节多种肿瘤细胞的增殖与迁移,但机制不明。GABAB受体的亚单位GB1具有多种亚型,其中GB1e(不含跨膜区及胞内区)的mRNA广泛表达于外周组织及多种人源肿瘤细胞系中。有一篇报道表明GB1e在人的正常的外周组织中是表达的,但是尚未见到肿瘤细胞中GB1e表达的报道。 本论文检测了外源性GB1e在人乳腺癌细胞MDA-MB-231及MCF-7中的亚细胞分布。首先,构建了带有不同标签的GB1e质粒,包括pEGFP-N1-GB1e-GFP, pEGFP-N1-HA-GB1e和pEGFP-N1-GB1e-3×Flag等;其次,构建了稳定表达GB1e的人乳腺癌细胞系MDA-MB-231/HA-GB1e和MCF-7/HA-GB1e。ELISA实验结果表明GB1e在MDA-MB-231和MCF-7细胞膜表面没有表达,confocal图像显示GB1e分布于细胞质中,免疫沉降法(IP)检测到GB1e可分泌到细胞培养液中,并且分泌性的GB1e可以通过吞噬作用重新进入细胞质。HA-GB1e稳定表达细胞系中, Baclofen能够增强Akt的磷酸化水平,但对细胞增殖没有影响。现有结果为后续研究GB1e在肿瘤细胞中的生物学功能奠定了实验基础。