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近些年,随着社会逐渐步入老龄化,阿尔茨海默病(Alzheimer’ s disease,AD)也受到了越来越多的关注。近20年来,A β(β-amyloid,Aβ)级联学说一直是阿尔茨海默病研究、治疗的核心之一,但基于该假说的药物均未能成功进入市场。虽然此类药物临床试验的失败给Aβ级联学说蒙上阴影,但是仍有诸多证据显示出A β是疾病发展过程的核心。溶酶体功能以及自噬功能异常近年也被认为是阿尔茨海默病的标志性特征,并且溶酶体、自噬功能障碍与A β的生成及降解密切相关。LC3是自噬启动的标志蛋白,CTSD(Cathepsin D)是主要的溶酶体降解酶。随着现代研究的不断进步和发展,针对AD的治疗也变得越来越多样化,由于AD的发病机制在其疾病的晚期阶段异常复杂,而且有待进一步明确,因此对于AD的治疗时机的选择越来越倾向于早期阶段。在中医针灸领域的研究中,显示出了针灸对AD的治疗作用,而且中医针灸“治未病”也一直是其优势所在。在本课题组的前期实验中,电针干预AD转基因小鼠能够改善其认知功能障碍,降低其脑内Aβ的水平。本次实验,我们选取4月龄AD转基因小鼠,对其进行电针干预,观察电针干预对AD转基因小鼠早期病理状态的影响,从溶酶体及自噬的角度来探讨电针干预防治AD的作用机制。实验目的选取4月龄APP/PS1双转基因小鼠,观察电针干预对其海马内LC3、CTSD、APP及A β表达情况的影响,从溶酶体和自噬的角度探讨在AD病理前期进行电针干预降低其脑内Aβ水平的作用机制。实验方法将16只4月龄雄性APP/PS1双转基因小鼠随机分为电针组和模型组;以8只4月龄雄性C57BL/6小鼠作为正常组。电针组电针“百会”、“涌泉”穴,正常组、模型组以与电针组相同的方法束缚,干预均隔日一次,6周后取其脑组织。免疫组化法观察小鼠皮质和海马内LC3的表达情况;免疫荧光双标法观察小鼠海马内LC3和A β、CTSD和Aβ的共表达情况;WB法检测小鼠海马内LC3Ⅰ、LC3Ⅱ、CTSD与APP的表达水平。实验结果免疫组化结果:在小鼠海马和皮质中,LC3主要表达于神经元的胞质和轴突。免疫荧光双标法结果:A β在模型组中有更多的表达,LC3和Aβ在模型组小鼠海马内存在共表达;CTSD和Aβ在小鼠海马内存在共表达。WB结果:模型组LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值小于正常组,P<0.01,差异有显著统计学意义;电针组LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值均值大于模型组,P>0.05(P=0.19),差异无统计学意义;电针组LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值小于正常组,P<0.05,差异有统计学意义。正常组CTSD含量大于模型组,P<0.01,差异有显著统计学意义;电针组CTSD含量大于模型组,P<0.05,差异有统计学意义。正常组APP含量小于模型组,P<0.01,差异有显著统计学意义;电针组APP含量的均值小于模型组,P>0.05,差异无统计学意义。相关性分析结果:小鼠海马内LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值与APP的水平呈负相关(r=-0.563,P<0.01);小鼠海马内CTSD的含量与APP的水平呈负相关(r=-0.50,P<0.05);小鼠海马内CTSD的含量与LC3的水平呈正相关(r=0.53,P<0.01)。结论在APP/PS1双转基因小鼠5月龄时,其海马内自噬处于抑制状态,溶酶体降解功能发生障碍。电针干预4月龄APP/PS1双转基因小鼠能够增加其神经元内CTSD的表达水平,电针可能通过增强其海马内溶酶体降解功能降低其脑内A β水平,改善其认知功能障碍,而电针对自噬功能的影响需要通过进一步实验去证实。