【摘 要】
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致病菌一直是人类安全和健康的巨大威胁,每年都有数百万人死于食源性致病菌的感染。在过去,烹饪时的高温可以杀灭所有的细菌,但随着包装食品的普及,加工、包装、运输的过程中都可能发生细菌感染,奶制品、饮用水、饮料都是致病菌的有效载体。因此,建立快速、便捷的食品中致病菌的检测方法对减少致病菌感染对人体的参在威胁具有重要意义。本文针对食品中常见的大肠杆菌O157:H7、克罗诺杆菌、鼠伤寒沙门氏菌、金黄色葡萄球
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致病菌一直是人类安全和健康的巨大威胁,每年都有数百万人死于食源性致病菌的感染。在过去,烹饪时的高温可以杀灭所有的细菌,但随着包装食品的普及,加工、包装、运输的过程中都可能发生细菌感染,奶制品、饮用水、饮料都是致病菌的有效载体。因此,建立快速、便捷的食品中致病菌的检测方法对减少致病菌感染对人体的参在威胁具有重要意义。本文针对食品中常见的大肠杆菌O157:H7、克罗诺杆菌、鼠伤寒沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和单增李斯特菌建立了三种快速检测方法。(1)建立奶粉中的克罗诺杆菌属等温链交换扩增的分子捕获侧向层析试纸检测方法本文中,我们开发了一种新的检测方法,用于快速,轻松地定量鉴定在婴儿配方奶粉中的克罗诺杆菌属。该方法很好地结合了等温链交换扩增(SEA)和分子侧向层析试纸(LFS)的优势。克罗诺杆菌的DNA模板的存在可以通过SEA等温标记扩增,扩增仅使用一对标记的功能引物,且无需使用热控制器。SEA的高放大效率可积累大量双标记扩增子,这些分子可通过使用荧光微球(FM)作为标记器,通过分子捕获被LFS捕获,在365 nm处激发后进行定量分析。即使是成分复杂的婴儿配方奶粉,也可以在不到一小时的时间内通过视觉检测极限浓度为10 cfu/m L的克罗诺杆菌,准确测定浓度为10~1至10~6cfu/m L的克罗诺杆菌。我们希望这种独特的SEA-LFS方法及其良好的测定性能可以成为食源性病原体检测领域中的有力分析方法。(2)建立水体中的鼠伤寒沙门氏菌基于表面增强拉曼光谱的纸基检测方法研究制备了以金纳米颗粒为结构基底、罗丹明6G为探针分子、银壳为增强基底的纳米粒子,通过混合纤维素膜富集被纳米粒子标记的大肠杆菌,再收集膜表面的拉曼光谱,快速检测出被水中的沙门氏菌。结果表明,在30 min内,可以检测到饮用水中的沙门氏菌,其浓度范围为10~1至10~6cfu/m L。这项工作具有简便性、快速性、便宜性、抗干扰能力和耐用性,为水中致病菌的检测的开发开辟了一条新途径。(3)建立水体中的多种致病菌基于表面增强拉曼光谱的自制的便携式双层过滤装置检测方法建立了基于注射器的自制便携式双层过滤装置的工程设计。该装置的核心元件是两个安装的具有不同孔径的过滤膜,上层过滤膜用于拦截较大的干扰物(拦截膜),下层过滤膜用于收集多个目标(浓缩膜)。它们的结合可以使被污染的环境水(例如湖水)迅速渗入该设备,并且保留大肠杆菌O157:H7,金黄色葡萄球菌和单增李斯特菌于浓缩膜上。与表面增强拉曼光谱(SERS)检测平台集成以解码已经附着在每种富集细菌上的SERS标签(SERS-Tag CVa,SERS-Tag R6G和SERS-Tag MB),实现了快速分离,浓缩和快速检测,从大量被污染的环境水中同时检测多种致病细菌。结果表明,在30 min内,可以同时检测到湖水中所有目标细菌,其浓度范围为10~1至10~6cfu/m L,最低浓度为10 cfu/m L。这项工作强调了检测多种水生病原体,为便利水和食品安全监控和管理的多功能分析工具的开发开辟了一条新途径。
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