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该研究通过肝癌细胞株体内体外实验、大鼠肝癌诱导实验,观察OCT预防肝癌形成、抑制肝癌生长、侵袭和转移的效果,对肝癌发生、发展的机制和OCT的抑瘤机制进行探索.第一部分生长抑素类似物对肝癌的抑制和其受体2的调节.SSTA抑制肿瘤的生长机制,一般认为是通过SSTRs的介导完成的,但作为G蛋白偶联受体(G-protein-coupled receptors,GPCR)的一种,SSTRs象其它GPCR类受体一样,在介导配体发挥作用的同时,自身的表达也受到配体的调节,但关于肝癌在SST治疗过程中SSTR的变化以及其对SST抑瘤效果的影响,目前尚未见相关报道.刘建生等检测Bel 7402肝癌细胞株的SSTR2mRNA,发现该细胞株呈现高密度的表达.故该研究采用Bel7402肝癌细胞株,通过观察OCT处理该细胞株的体内、体外实验,了解OCT的抑瘤效果和SSTR2mRNA和蛋白表达的调节.方法:将Bel7402肝癌细胞置于含10％小牛血清的RPMI1640培养液中,在37℃、5%CO2、饱和湿度的环境下培养.首先,将细胞传入96孔板,分成四组:A组为对照组,仅加入含10%小牛血清的RPMI1640培养液;B、C、D组中除加入上述培养基外,还分别按终浓度0.002mg/ml、0.006mg/ml和0.01mg/ml的量加入OCT.用MTT比色试验,连续观察4天,检测肝癌细胞的增殖情况.将细胞传入6孔板中,分成两组:OCT组加入含0.01mg/ml善宁的RPMI1640培养液,对照组在1640培养液中加入等量PBS液.分别于24、48h在倒置显微镜下观察细胞的形态变化;通过伤痕试验观察肝癌细胞迁徙无细胞带的情况,了解细胞的侵袭能力;通过细胞粘附实验了解肝癌细胞的粘附能力,公式:粘附率=(1-未粘附细胞数/细胞总数)×100%;培养72h后,制成单细胞悬液,流式细胞仪检测细胞周期和细胞表面SSTR2的表达,半定量RT-PCR的方法检测细胞SSTR2mRNA的表达.结论:1.SSTA可以有效抑制体内肝癌种植瘤的生长,并预防肝癌复发转移,但短期抑制体外肝癌细胞生长的效果并不明显.2.SSTR2是SSTA抑制肝癌的重要介导,但它同样也受到SSTA的调节,即短期SSTA处理引起肝癌细胞上SSTR2脱敏、内化,SSTA的功效受到部分抑制;长期持续的治疗可以导致肝癌细胞SSTR2表达的增加,有利于SSTA抑制肝癌作用的更好发挥.第二部分生长抑素类似物抑制肝癌分子机制的研究.该部分检测Bel7402肝癌细胞及其种植瘤中cMet、TGFβ1、磷酸化Smad2、Smad4和Smad7的表达,观察OCT对这些因子的影响,分析OCT抑瘤作用和这些信号传导通路的关系.方法:同第一部分将培养细胞分成两组:OCT组和对照组.流式细胞仪检测Bel 7402细胞表面cMet的表达;半定量RT-PCR检测细胞的Smad4mRNA的表达.裸鼠肝癌原位种植瘤模型和分组治疗同第一部分;免疫组化检测种植瘤的cMet、TGFβ1、磷酸化Smad2、Smad4和Smad7表达;半定量RT-PCR检测种植瘤的Smad4mRNA的表达.结论:1.下调肝癌细胞上cMet蛋白的表达可能是SSTA抑制肝癌生长、侵袭转移的重要机制之一.2.磷酸化Smad2表达的降低可能是Bel7402肝癌细胞的重要特征之一.SSTA可以显著上调肝癌细胞Smad4的表达,恢复或部分恢复TGF β/Smads系统的信号传导,达到抑制肝癌生长的效果.第三部分大鼠诱导肝癌过程中SSTR2、cMet、TGF β/Smads信号通路的变化和生长抑素类似物的影响.与其他绝大多数肿瘤一样,肝癌的发生通常受多因素的作用,表现为多步骤、多阶段的复杂的演变过程,常常经历多种分子生物学与细胞生物学方面的变化.该部分通过二乙基亚硝胺溶液(Diethylnitrosamine,DENA)诱发大鼠肝癌的模型观察肝癌形成过程中SSTR2、cMet和TGF/Smads信号系统的变化,对肝癌的形成和发展机制进行一定的探索,通过OCT对肝硬化大鼠的治疗,观察OCT预防肝癌形成的效果,分析其可能的机制.方法:1.大鼠化学诱导肝癌模型的制作:选择6周龄雄性SD大鼠,体重110~180g,给予新鲜配置的DENA代饮水,开始按0.05g/L的浓度给予,2周后改为0.1 g/L,同时给予标准块状食料喂养,14周后改为正常饮水,共喂养22周.2.分组治疗:在给DENA处理8周后,将大鼠随机分为OCT组(n=8)和对照组(n=28):OCT组大鼠,给予腹腔注射0.1mg/kg善宁治疗,对照组给予等量生理盐水治疗,均为每天一次,持续14周.3.标本的获取:分别于给药后8周、16周和22周,麻醉下开腹,观察肝脏情况,并切取肝脏或肝癌组织.正常大鼠肝脏标本5例,对照组诱癌8周和16周各7例,22周6例,OCT组诱癌8周8例,16周7例,22周4例,1例OCT组肝癌(16~22周间死亡).4.免疫组化:免疫组化检测大鼠肝脏和肝癌上SSTR2、cMet、TGF β 1、磷酸化Smad2、Smad4和Smad7的表达.5.半定量RT-PCR:半定量RT-PCR检测SSTR2和Smad4的表达.结论:1.肝癌的发生机制非常复杂,大鼠肝硬化晚期SSTR2或/和Smad4的表达的减少、甚至消失,cMet、TGFβ1和Smad7的过高表达,磷酸化Smad2的减少,在大鼠肝癌的发生、发展中都起着非常重要的作用.2.OCT能有效地预防大鼠肝癌的形成,并减少大鼠诱癌的死亡率,其机制可能与促进SSTR2的表达、下调cMet表达、促进TGFβ1/Smads抑制性信号的传导有关.