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背景目的:在中国,癌症的健康负担正在增加,每年有超过160万人被诊断出,并且有120万人死于癌症。中国的病例占全球新诊断乳腺癌的12.2%,占全球乳腺癌死亡人数的9.6%。目前的预测和统计数据表明,全球乳腺癌发病率和相关死亡率均呈上升趋势。据预测,到2050年,全球女性乳腺癌的发病率将达到每年约320万新病例。在不同分子分型的乳腺癌中三阴性乳腺癌(triple-negative breast cancer,TNBC)具有高转移,高复发的特点,预后较差,预期生存时间仍得不到满意的效果。其对全世界社会的影响以及预防和治疗措施具有超强的紧迫感,虽然手术、化疗等临床治疗取得进展,但预期生存时间尚未达到。因此,为乳腺癌制定有效、安全的早期诊断和治疗策略仍然是全球公共卫生的迫切需要。核仁纺锤体相关蛋白(Nucleolar Spindle‐Associated Protein1,NuSAP1)是新近发现的一种分子量约为52 kDa的脊椎动物蛋白,参与纺锤体组装调控和正常有丝分裂的维持。目前多位学者研究发现,NuSAP1过表达与多种恶性肿瘤密切相关。本研究我们分析NuSAP1过表达对乳腺癌预后的影响,并探讨了NuSAP1通过Wnt/β-catenin和上皮间充质转化(Epithelial-Mesenchymal Transition,EMT)通路促进TNBC细胞的增殖和侵袭。研究方法:1、NuSAP1在乳腺癌中的表达水平及临床特征相关性分析。(1)从癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)下载了RNA-seq乳腺癌数据,并使用R软件筛选出了NuSAP1基因。(2)通过UALCAN和GEPIA在线工具分析NuSAP1在乳腺癌中的表达。(3)应用R软件对TCGA中乳腺癌患者的临床资料进行筛选分析,生存曲线由Kaplan-Meier绘图仪绘制。2、实时定量聚合酶链反应(real time quantity polymerase chain reaction,qRT-PCR)和免疫印迹法(Western blotting)检测4种乳腺癌细胞(SKBR-3,BT-549,MDA-MB-231,MCF-7)和1种正常乳腺上皮细胞(MCF-10A)中NuSAP1的表达水平。3、NuSAP1对TNBC细胞生物学行为的影响。使用慢病毒介导及质粒瞬时转染沉默或过表达TNBC细胞中(BT-549,MDA-MB-231)NuSAP1基因的表达,设立阴性对照组(NC),敲减NuSAP1组(shNuSAP1),敲减基础上过表达NuSAP1组(sh-NuSAP1+ov-NuSAP1)并通过细胞增殖及毒性检测试剂盒(CCK8)及Transwell实验检测各组细胞的增殖,迁移和侵袭能力。4、NuSAP1与Wnt/β-catenin和EMT通路之间的关系。通过qRT-PCR和Western blotting检测NuSAP1及通路相关蛋白的表达水平。结果:1、NuSAP1在乳腺癌中表达上调;差异表达的NuSAP1与多种临床病理因素有关,NuSAP1表达水平越高,生存时间越短。2、NuSAP1在乳腺癌细胞中的表达比正常乳腺上皮细胞高,尤其是在MDA-MB-231和BT-549细胞中表达较高。3、与NC组相比,sh-NuSAP1组细胞的增殖和侵袭能力下降;与sh-NuSAP1组相比,sh-NuSAP1+ov-NUSPA1组细胞的增殖和侵袭能力增强。4、与NC组相比,shNuSAP1组细胞Cyclin D1,Vimentin,Slug,Twist,Wnt3a and pβ-catenin蛋白表达下降;E-cadherin表达明显增加;与sh-NuSAP1组相比,sh-NuSAP1+ov-NUSPA1组细胞Cyclin D1,Vimentin,Slug,Twist,Wnt3a and pβ-catenin蛋白表达上调,E-cadherin表达明显降低。结论:NuSAP1是一种致癌基因,改变TNBC细胞中NuSAP1基因的表达后,Wnt/β-catenin和EMT通路中相关蛋白的表达水平以及TNBC细胞的增殖和侵袭能力也随之改变。