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目的：1.构建PLCε原核表达系统。表达、分离纯化PLCε蛋白并鉴定。2.制备兔抗PLCε蛋白抗血清，进一步分离纯化验证其特异性，并初步在膀胱癌中应用。方法：1.应用RT-PCR从人膀胱癌细胞cDNA中克隆出氨基端PLCε基因，将此氨基端PLCε片段连接至pGEX-6P-1原核表达载体上，构建原核表达载体pGEX-6P-1/PLCε。2.将原核表达载体pGEX-6P-1/PLCε转化大肠杆菌BL21，以IPTG诱导表达GST-PLCε重组蛋白，通过GST亲和层析系统纯化重组蛋白，鉴定所纯化的重组蛋白。3．将纯化的GST-PLCε重组蛋白免疫家兔，制备家兔抗PLCε的抗血清，经蛋白A抗体纯化系统分离纯化抗血清，ELISA检测抗血清效价,Western blot测定其特异性。4.利用制备的PLCε抗血清包被ELISA板，制备快速PLCε蛋白血清检测ELISA试剂盒，检测30例膀胱癌患者与6例正常人血清中PLCε蛋白的表达情况，初步探索PLCε抗血清在膀胱癌中应用。结果：1．经RT-PCR、基因重组、酶切及测序验证原核表达载体pGEX-6P-1/PLCε构建成功，通过GST亲和层析系统分离纯化，得到GST-PLCε重组蛋白。2.将纯化后的GST-PLCε重组蛋白免疫家兔，经纯化获得抗血清；ELISA效价1:16000以上；Western blot结果显示，该抗血清与原核表达的GST-PLCε重组蛋白和人膀胱癌T24细胞株表达的PLCε蛋白特异性结合。3.制备的抗血清包被的ELISA可以检测到血清中PLCε蛋白的表达，膀胱癌患者血清中PLCε为5.62±2.79ng/ml高于正常对照组2.53±0.42ng/ml（P＜0.05）,差异具有统计学意义。结论：成功构建PGEX-6P-1/PLCε原核表达系统，纯化获得了较高纯度的GST-PLCε重组蛋白，并以重组蛋白为免疫原，制备了兔抗PLCε的抗血清，初步用于膀胱癌的血清学检测。PLCε的抗血清的获得为进一步研究PLCε蛋白功能和作用机制奠定了基础，同时也为开发快速检测膀胱癌诊断试剂盒提供了实验数据。目的：1.探讨HepaCAM基因在前列腺组织及细胞株中的表达，分析其表达与各临床病理参数的相关性。2.利用腺病毒载体，过表达HepaCAM基因，检测其对人前列腺癌细胞增殖、凋亡及侵袭转移等生物学功能的影响及机制探讨。方法：1.应用RT-PCR和Western blot等技术，检测前列腺细胞株RWPE-1,LNCap, DU145及PC3中HepaCAM基因的表达。应用IHC技术检测75例前列腺组织中HepaCAM蛋白的表达情况，统计学分析其表达与各临床病理参数的相关性。2.应用WST-8试验、FCM、划痕试验及Transwell等实验技术检测HepaCAM对前列癌LNCap, DU145和PC3细胞株增殖、凋亡、侵袭和转移的影响。应用Western blot检测HepaCAM、Bax、Bcl-2、MMP2、MMP9和GAPDH等相关蛋白水平的表达。3.应用细胞免疫荧光、RT-PCR和Western blot等技术，检测过表达HepaCAM后前列腺癌LNCap细胞中AR的mRNA和蛋白水平的影响。应用Western blot和ELISA技术检测HepaCAM对其胞质及分泌型PSA的影响。应用EGF处理细胞后，Western blot检测HepaCAM对癌细胞P-ERK及t-ERK等蛋白表达的影响。结果：1. HepaCAM基因在LNCap, DU145和PC3细胞中表达缺失，在前列腺癌组织中的表达与BPH及正常前列腺组织相比显著降低，且与前列腺癌各临床参数间均无相关性。2. HepaCAM基因能够抑制前列腺癌LNCap, DU145和PC3细胞的增殖，诱导细胞凋亡，降低癌细胞侵袭及转移。体外过表达HepaCAM后能够降低Bcl-2、MMP2和MMP9的表达，增加Bax的表达水平。3.细胞免疫荧光及Western blot结果显示，HepaCAM可以抑制前列腺癌LNCap的AR核转移，降低AR的表达。Western blot和ELISA检测PSA表达明显下降。HepaCAM可以阻滞ERK的磷酸化表达水平。结论:在前列腺癌中HepaCAM低表达，过表达HepaCAM可以抑制前列腺癌细胞增殖、侵袭与转移，诱导细胞凋亡。相关分子机制可能是HepaCAM抑制前列腺癌AR的核转位和ERK磷酸化来实现的。因此，HepaCAM基因缺失对临床判断前列腺癌的发生发展有指导意义，为肿瘤的生物治疗提供新的分子靶点。