农杆菌介导GsZFP1基因转化亚洲百合‘Cedeazzle’的研究

来源 :东北农业大学 | 被引量 : 3次 | 上传用户:lv53647678
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百合(Lilium spp.)是单子叶植物亚纲百合科(Liliaceae)百合属(Lilium)多年生球根花卉,其花大、色彩丰富、花型优美,是世界上重要的鲜切花之一,有2000余年栽培历史,具有较高的经济价值和观赏价值。而亚洲百合的花色、花型各异,花姿奇特,经常用于盆栽观赏,花坛、花镜布置或丛植、片植于园林、绿地中美化环境。然而,由于亚洲百合系列品种对栽培养护要求较高,不喜高温,喜凉爽湿润的气候,夏季栽培需用遮阳网,生产成本高。并且在北方亚洲百合生产受到土地盐渍化、季节性干旱等逆境的胁迫,限制了其在北方地区的广泛应用,因此,急需培育抗逆性强的亚洲新株系来满足广大消费者的需求。本研究以亚洲百合‘耀眼’为试材,利用农杆菌介导法将耐逆基因GsZFP1导入亚洲百合中,建立了亚洲百合‘耀眼’的高频再生体系和遗传转化体系。通过抗性筛选、PCR检测和RT-PCR检测,得到阳性转基因植株。然后对阳性植株进行干旱胁迫处理,分析其耐干旱胁迫的能力及生长发育情况,培育出耐旱的转基因亚洲百合新株系。从而充分利用我国北方的土地资源,扩大亚洲百合的种植面积,提高亚洲百合的生产质量,来满足大众的需求,并为我国的城市绿化节约水资源,具有重要的研究价值和广阔的开发应用前景。主要研究结果如下:1.构建了由E12-CaMV35S强组成型启动子调控的植物表达载体pCEOM-GsZFP1,用于基因GsZFPl在单子叶植物中的整合表达。2.建立了亚洲百合‘耀眼’高频直接分化再生体系。以亚洲百合‘耀眼’鳞片为外植体,诱导不定芽分化适宜培养基为:MS+6-BA3.0mg/L+NA A0.2mg/L;无菌苗鳞片叶不定芽诱导适宜培养基为:MS+6-BA1.0mg/L+2,4-D0.3mg/L;无菌苗叶片诱导不定芽分化适宜培养基为:Ms+NA A1.0mg,L+6-BA0.4mg/L+KT0.2mg/L;小鳞片诱导不定芽分化适宜培养基为:MS+6-BA2.0mg/L+NA A0.2mg/L+30g/L蔗糖;生根诱导适宜培养基为:MS培养基。3.建立了农杆菌介导亚洲百合‘耀眼’的遗传转化体系。以小鳞片作为转化材料,预培养5d;农杆菌侵染液OD600值为0.6左右,侵染时间为20min;共培养时间为3d,且培养基中不含NH4N03:抑菌剂Cef的使用浓度为350mg/L;诱导小鳞片不定芽分化时,筛选剂草丁磷(PPT)的适宜浓度为1.75mg/L;诱导根分化时,筛选剂草丁磷(PPT)的适宜浓度为1.25mg/L。4.通过农杆菌介导法将GsZFP1基因导入亚洲百合‘耀眼’中,经PCR检测,转GsZFPl基因的‘耀眼’植株呈阳性的有36株,PCR阳性率为23.08%;对PCR阳性植株进行RT-PCR检测,其中16株呈阳性。s.GsZFPl基因能提高亚洲百合‘耀眼’的耐旱性。
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