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背景与目的: 重症肌无力(myasthenia gravis,MG)是由乙酰胆碱受体(acetylcholinereceptor,AChR)抗体介导的、神经肌肉传递障碍为表现的一种器官特异性自身免疫病。MG的发病与遗传因素、机体免疫功能异常及免疫调节功能紊乱等多种因素有关,对重症肌无力的相关研究显示,该病的发生和胸腺的关系十分密切,80％-90％的MG患者胸腺有胸腺增生或胸腺瘤等异常病变。胸腺作为中枢免疫器官是T淋巴细胞发育、分化、成熟的场所,T细胞在胸腺经历一系列膜分子的表达及阳性选择和阴性选择过程,获得功能性TCR的表达、MHC限制性和自身耐受性,发育成熟进入外周血液循环,并定居于脾脏、淋巴结等外周免疫器官。胸腺结构和功能异常,将影响T细胞在胸腺的分化发育和成熟。由于阴性选择是清除自身反应性T细胞、形成自身免疫耐受的关键环节,因此,阴性选择障碍是导致自身免疫性疾病发生的原因之一。 近年来有关研究发现,MG的发病过程常常与T细胞异常有关,T细胞介导的细胞免疫功能紊乱是MG发病的一个重要原因。CD45是一种单链跨膜糖蛋白,包括CD45RA、CD45RB、CD45RC、CD45RO等多种异构体,因其胞质区具有酪氨酸磷酸酶(protein-tyrosine phosphatase,PTP)活性,在调节信号转导和TCR、BCR介导的细胞活化中有重要作用。多种细胞(如T细胞、B细胞、NK细胞等)均可表达CD45分子,其中T细胞表面的CD45分子的表达对其发育、分化及功能的发挥影响较大,CD45RA和CD45RO与T细胞的功能状态及T细胞在胸腺的分化过程密切相关。 本研究采用免疫组化法检测CD45RA、CD45RO分子在MG增生型胸腺组织中的表达,并用流式细胞术检测MG患者胸腺细胞表面CD45RA、CD45RO、以及CD4和CD8分子的表达水平,通过RT-PCR和Real time PCR技术从基因水平上检测了CD45、CD69、Bcl-2及CD28分子的表达,旨在探索MG增生型胸腺组织中T细胞亚群的发育和CD45分子在疾病中的作用,为深入研究MG的发病机制提供依据。 方法: 1.采用免疫组化法检测15例MG患者增生型胸腺和10例正常对照者胸腺组织CD45RA、CD45RO分子的分布及表达。 2.采用流式细胞术检测法分析15例MG患者增生型胸腺和10例正常对照者胸腺细胞CD4、CD8、CD45RA、CD45RO的表达。 3.采用RT-PCR法、Real time PCR法定量分析7例MG患者和7例正常对照胸腺组织中CD45、CD69、Bcl-2及CD28分子mRNA的表达。 结果: 1.免疫组化显示,MG组和正常对照组胸腺组织中CD45RA均呈弱阳性表达,二者无明显差异(p>0.05),而CD45RO在MG组呈强阳性表达且为灶状分布,与对照组相比有明显差异(p<0.05)。 2.流式细胞术检测结果显示,MG患者胸腺组织中CD45RA分子表达显著低于对照组(p<0.01),而CD45RO分子表达显著高于对照组(p<0.01)。MG患者胸腺双阴性细胞(CD4-CD8-)与对照组相比无统计学差异(p>0.05),双阳性细胞(CD4+CD8+)显著性高于正常对照组(p<0.05),而单阳性细胞(CD4+CD8-和CD4-CD8+)在MG组均显著性低于对照组(p<0.05)。 3.MG组和正常对照组胸腺组织均有CD45、CD69、bcl-2及CD28 mRNA的表达,通过荧光定量PCR进一步定量分析发现,MG患者胸腺组织中CD45、CD69、bcl-2和CD28 mRNA的表达与对照组相比分别上调了2.55、2.03、2.21和2.08倍(2-△△Ct>2)。 结论: 1.MG增生型胸腺组织中CD45RO亚型表达显著异常,可能是胸腺增生型MG发病机制的一个重要因素,与MG患者胸腺组织T细胞分化发育异常有关; 2.MG胸腺细胞存在异常活化,CD45 mRNA的高表达可能对TCR信号途径下游通路进行了调控,介导了CD69的表达,对于细胞功能的发挥起促进作用。