转BADH基因植物的抗逆性与钙离子信号及热激蛋白的有关系

来源 :山东农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:liongliong589
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
在非生物胁迫下,许多植物适应环境的重要机制就是积累一些低分子量的相容性物质,如甜菜碱(GB,Glycine betaine)、脯氨酸、可溶性糖等。其中甜菜碱是一种有特殊功效的相容性物质。甜菜碱在提高植物环境逆境(例如盐胁迫或高温胁迫)的抗性方面有重要作用,并且甜菜碱提高植物耐受性的同时伴随着热激蛋白(HSP, heat shockprotein)的积累。甜菜碱提高抗逆性与信号转导和离子稳态有关。   本研究在前期工作基础上利用转BADH基因的烟草和番茄材料,结合外源甜菜碱处理的方法,分析甜菜碱的作用与不同的逆境胁迫及不同遗传背景的关系,探究转基因植物耐受性获得中与热激蛋白和钙-钙调蛋白信号途径的关系,甜菜碱提高光合性能以及甜菜碱对活性氧清除系统的作用。研究结果和主要结论如下:   (1)利用非损伤微测技术,对外源甜菜碱处理和转BADH基因烟草(体内积累甜菜碱)进行钙离子(Ca2+)跨膜流速变化趋势的分析研究。实验结果表明:烟草根部的伸长区表皮细胞用NaC1处理后,产生一个瞬态Ca+外流,高峰值在1-2分钟内。甜菜碱可降低这种外流的峰值。提高NaCl(50-100mM)浓度后,峰值不再升高,Ca2+-ATPase抑制剂(Eosin Y,Eryth-B和CPA)也没有显著影响Ca+外流,表明这种瞬时的外流主要是细胞壁的阳离子交换;盐胁迫24小时后,Ca+呈现内流趋势,与此同时低浓度的甜菜碱显著增加NaC1诱导的Ca2+内流值。药理学实验结果表明,胁迫条件下甜菜碱可通过LaCl3敏感的钙离子通道加强Ca2+内流。   (2)甜菜碱升高了胁迫下细胞内自由钙离子浓度([Ca2+]cyt)。激光共聚焦的实验结果证实,无论是外源还是内部合成甜菜碱都可适度升高胞质内自由钙离子浓度。非损伤微测技术和激光共聚焦的实验结果,从动态和静态两方面综合印证了盐胁迫条件下甜菜碱与钙离子之间的因果关系。   (3)甜菜碱提高了非生物胁迫下的植物体内钙的积累。进一步研究甜菜碱对Ca+吸收的重要作用,对植物中的Ca2+含量进行分析比较表明,在长时间盐和高温胁迫下,甜菜碱预处理的和转基因植物中Ca2+含量明显高于野生型。   (4)甜菜碱增强钙调蛋白(CaM)和热激因子(HSF)基因的表达,从而诱导HSP的积累。实时定量PCR实验,从基因表达层面证实甜菜碱与钙-钙调蛋白(Ca2+-CaM)以及HSP的因果关系。药理实验证实Ca2+和CaM增加了HSFs和HSP基因表达水平,HSP70的Western杂交结果也证实了HSP的积累。Western杂交的药理学实验,从蛋白层面证明甜菜碱可以通过Ca2+-CaM信号途径诱导热激蛋白HSP70的合成积累。结果表明:甜菜碱作为辅助因子增强盐或热胁迫下Ca2+的吸收,并通过Ca+-CaM的信号途径诱导HSP的转录和翻译。   (5)甜菜碱降低活性氧(ROS)的积累。过氧化氢(H2O2)和超氧阴离子自由基(O2-)在热激下积累,但是转BADH基因植株中积累量少于野生型。另一重要发现是外源添加甜菜碱在活体外不能清除H2O2和O2-,但酶抽提物能降低ROS的浓度,并且转基因植物中的明显清除能力强。这些结果表明在活体内积累甜菜碱不能直接清除ROS,而是通过体内的ROS清除系统发挥作用。   (6)甜菜碱提高植物的抗氧化酶活性,减轻膜伤害的。转BADH基因植物的抗氧化酶活性高于野生型,相对电导率(REC)和丙二醛(MDA)的含量低于野生型,表明甜菜碱积累可提高抗氧化酶活性,减轻膜伤害。   (7)甜菜碱提高ROS清除酶的基因表达,药理学实验证实Ca2+和CaM增加了CuSOD、APX1和CAT1基因的表达水平,从基因表达层面证实甜菜碱甜菜碱可以通过Ca2+-CaM途径影响一系列基因的表达。   (8)甜菜碱提高植物逆境胁迫下的光合能力,减轻光抑制。在42℃热激条件下观测叶绿素荧光表明转基因植物比野生型有较高的光合能力。表明积累甜菜碱可减轻热激引起的光抑制。在盐胁迫下也有类似的结果。同时D1蛋白的Western杂交结果表明甜菜碱提高了D1蛋白的含量,加快D1蛋白的周转,加速PSII的修复。   盐和高温是两种普遍的非生物胁迫,利用外源甜菜碱处理及两种转BADH基因材料,在非生物胁迫(高温和盐胁迫)下,研究甜菜碱在不同植物的遗传背景下的抗逆性机制,排除了材料差异和转基因事件引起的其他影响,更好地证实了甜菜碱的生物学功能。从钙信号转导、活性氧清除、光合机构的保护以及热激蛋白等相关基因表达等方面综合阐明:非生物胁迫产生活性氧的积累,形成变性蛋白,伤害细胞的正常生命活动,引起光合能力下降,影响生物量的积累。胁迫可引起Ca2+内流,[Ca2+]cyt适度升高,可以加快下游的信号转导,从而诱导HSP的转录,获得HSP的积累,减少伤害,是植物细胞一种积极的防御措施。甜菜碱的积累,无论是外源处理还是内部合成,都可加强这一信号,诱导胞质内钙离子浓度适度升高,并通过Ca2+-CaM的信号途径诱导较多HSP的转录和翻译,提高防御能力。甜菜碱通过钙离子信号系统,增加HSP的积累,发挥分子伴侣作用,帮助变性蛋白复性,减少变性蛋白的积累,从而提高植物抗逆性。另外甜菜碱可诱导活性氧清除酶的表达,提高抗氧化酶活性,减少活性氧的积累,从而减轻胁迫造成的伤害。
其他文献
目的:分析对严重痔疮患者应用微创痔疮手术(PPH)的临床效果.方法:选取我院收治的108例严重痔疮患者进行研究,将其均分成对照组和观察组,对照组54例采用传统手术治疗,观察组54
目的:探讨踝关节创伤性关节炎采用关节镜联合关节牵张成形术治疗的临床效果.方法:我院选取于2019年6月-2020年6月本院收录的66例踝关节创伤性关节炎患者进行探究比对.我院采
目的:探讨CT和核磁共振诊断股骨头坏死的临床效果.方法:本次研究对象共64例,是我院收治的股骨头坏死患者,选取时间段为2018年3月-2019年3月.所有患者分别进行CT和核磁共振检
目的:观察溶血和血液采集方式对生化检验结果的影响.方法:随机选择60份存在误差的生化检验结果进行复检,对影响生化检验结果的相关因素进行分析,并制定改进措施.结果:影响生
期刊
期刊
目的:研究结直肠癌根治术患者通过手术室护理之后的效果.方法:本项目自2019年3月起,到2020年6月结束,研究期间共入组110例腹腔镜结直肠癌根治术治疗的患者,通过随机抽签法分
在很远的地方,有一座妖精的花园,花园里开满了美丽的玻璃花。  小妖精们每天用亮晶晶的银色喷壶,一刻不停地为那些玻璃花洗澡,因为妖精大王,也就是花园的主人说,只有这样那些花才会高兴。每一个小妖精都得勤奋地干活,不然,就会被妖精大王变成一个银色的喷壶。  有一天,玻璃花园里发生了一件从来没有过的事:一个名字叫米乌拉的小妖精打碎了一朵玻璃花。  可怜的米乌拉!他简直吓坏了,眼睁睁地看着自己被妖精大王施了
期刊
目的:探讨血涂片法复核在血小板计数(PLT)减少的应用价值.方法:选取2019年3月至2020年3月收集的患者的静脉血标本86份,根据PLT范围,均分为两组,其中,PLT为(20~50)×109/L的实
目的:探析关节半月板损伤患者选取螺旋CT(MSCT)诊断的临床价值.方法:选取2019年5月至2020年5月间本院膝关节半月板损伤患者62例,患者入院后均经关节镜检查或病理诊断确诊为膝