磁性硅基材料固定化柚苷酶的研究

来源 :大连工业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:leohuo
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由α-L-鼠李糖苷酶和β-D-葡萄糖苷酶构成的复合柚苷酶,可水解柑橘水果中的柚皮苷、橙皮苷等苦味物质,用于柑橘果汁的脱苦。为了增加柚苷酶的重复利用性和稳定性,减少工业生产成本,一般先将柚苷酶固定于载体后,再进行果汁的脱苦。但在实际工业生产中,一般常用的固定化材料需要依靠自然沉降实现固液分离,存在耐酸性差和分离速度慢的问题。本论文通过制备新型的磁性硅基复合微球,研究了该微球固定化柚苷酶过程各工艺参数的影响,并分析了该固定化柚苷酶的酶学性质。分别采用交联-包埋法和吸附偶联法,以海藻酸钠及壳聚糖为载体,戊二醛为交联剂进行固定化柚苷酶,得到海藻酸钠及壳聚糖固定化柚苷酶最佳工艺。结果表明,壳聚糖与海藻酸钠固定化柚苷酶的最佳酶比活力分别为126.86 U·g-1与55.23 U·g-1,且前者的热稳定性高于后者,同时操作稳定性较好,循环利用5次后,其相对酶活力分别为74.32%和34.19%。因此,壳聚糖作为固定材料固定化柚苷酶具有明显优势。依次利用化学共沉淀法、溶胶凝胶法及乳液交联法制备得到磁性硅基壳聚糖微球(MSC),对MSC微球表面基团进行环氧基修饰活化,确定了最佳修饰工艺为:NaOH浓度1.5 mol·L-1,环氧氯丙烷体积分数50%,NaBH4浓度0.6 g·L-1、活化温度40℃,活化时间4 h。最佳条件下MSC微球上环氧基密度可达59.14μmol·g-1。以环氧基化磁性硅基壳聚糖微球(MSCE)为载体固定化柚苷酶,确定了较优的柚苷酶固定化工艺条件为:pH 3.0,温度30℃,固定化时间4 h,给酶量57.48 U·mL-1。此时MSCE固定化柚苷酶的载酶率、酶活回收率及最大酶比活力分别为31.29%、88.92%和409.33 U·g-1。另外,对MSCE固定化柚苷酶的酶学性质研究结果显示,相比游离柚苷酶,MSCE固定化柚苷酶的最佳反应pH与最佳反应温度均无显著变化,但其pH稳定性和温度稳定性得到了很大提升,且具备良好的操作稳定性与储藏稳定性。
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