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鸡矢藤(鸡屎藤)Paederia scandense(Lour)Merrill为茜草科(Rubiaceae)鸡矢藤属蔓生草本植物，有较强的臭味。鸡矢藤作为常用的中草药之一，主要用于治疗与肝脏相关的疾患。本课题以HepG2.2.15细胞作为靶细胞，采用MTT比色法观察不同浓度下鸡矢藤提取物对细胞的毒性作用；并采用酶联免疫吸附试验(ELISA)的方法测定细胞培养上清中HBsAg，HBeAg的含量，以此评价鸡矢藤提取物体外抗HBV的作用。
目的：
1.提取鸡矢藤挥发油，检测挥发油成分及对其HepG2.2.15细胞的药效作用。
2.提取鸡矢藤浸提物质，进行细胞毒性试验，确定有效成分的部位。
3.提取鸡矢藤多糖，进行细胞毒性实验。确定有效成分的部位。
4.检测以上提取物质在最大无毒浓度下对HBsAg、HBeAg的分泌抑制。
方法：
1.鸡矢藤药材的预处理
2.HepG2.2.15细胞株筛选体系的优化
1)通过不同的培养时间，确定达到筛选标准的最低培养时间。
2)检测筛选药物G418对于HepG2.2.15细胞的培养必要性。
3.水蒸气法与有机溶剂法提取鸡矢藤挥发油
1)挥发油提取条件的优化
2)两种挥发油的GC-MS分析
3)挥发油助溶剂的筛选
4)MTT法检测鸡矢藤挥发油对HepG2.2.15细胞的毒性作用
5)CPE法确定鸡矢藤挥发油对HepG2.2.15细胞的最大无毒浓度
6)鸡矢藤挥发油对HepG2.2.15细胞分泌HBsAg、HBeAg的抑制
4.鸡矢藤浸提物质的提取
1)多种方法提取鸡矢藤浸提物质，并确立最优方案。
2)鸡矢藤浸提物初步细胞毒性试验
3)大孔树脂HP20分离鸡矢藤粗提物质
4)各洗脱组分对HepG2.2.15细胞的抑制作用
5)鸡矢藤浸提物质对HepG2.2.15细胞分泌HBsAg、HBeAg的抑制
6)各洗脱组分Hoechst H33258荧光染色细胞形态观察和流式细胞术检测细胞凋亡情况
7)各洗脱组分化学成分的初步鉴定
8)黄酮和鞣质含量测定
5.鸡矢藤多糖的提取
1)鸡矢藤粗多糖的提取
2)粗多糖除蛋白方法的优化
3)鸡矢藤粗多糖的分离纯化
4)鸡矢藤多糖分离组分初步鉴定
5)鸡矢藤多糖分离各组分对HepG2.2.15细胞的毒性抑制作用
6)鸡矢藤多糖分离组分对HepG2.2.15细胞分泌HBsAg、HBeAg的抑制
结果：
1.HepG2.2.15细胞培养1天即可达到筛选标准，药物筛选过程中，不添加G418效果优于添加G418培养。
2.初步得到两种鸡矢藤挥发油，水蒸气法优于有机溶剂提取法，1％DMSO是合适的挥发油助溶剂。鸡矢藤挥发油在31ug/ml～2000ug/ml的浓度范围内对HepG2.2.15细胞有抑制作用。TC50为1550ug/ml，TC0为500ug/ml。在最大无毒浓度下，鸡矢藤挥发油对HBsAg最大抑制率为72.49％，治疗指数为6.74，HBeAg最大抑制率为23.64％。
3.确立最佳提取方案为75％水提醇沉。粗提取物经大孔树脂HP20层析洗脱，得到5种洗脱物质，其中10％、20％乙醇洗脱部位对HepG2.2.15细胞有诱导凋亡作用，经过检测，主要成分为黄酮类物质。
4.鸡矢藤多糖经过DEAE纤维素层析洗脱，得到5个组分，鸡矢藤多糖对HepG2.2.15细胞最大无毒浓度为25mg/ml，在此浓度下，对HBsAg、HBeAg的分泌有一定的抑制作用。
结论：
1.鸡矢藤挥发油是鸡矢藤散发特有气味的丰要物质，鸡矢藤挥发油得牢较低。仅为0.23％。最大无毒浓度下，对HBsAg、HBeAg仍有一定的抑制作用，是有效的低毒物质。
2.鸡矢藤水浸75％醇沉物质经过HP20大孔树脂洗脱，其中10％，20％乙醇洗脱部位对HepG2.2.15细胞有诱导凋亡现象，经初步检测，该组分的主要成分为黄酮类物质。
3.鸡矢藤多糖对HepG2.2.15细胞没有毒性，在最大无毒25mg/ml浓度下，对于HBsAg、HBeAg分泌有一定的抑制作用。