背景：随着麻醉学不断发展，小儿外科手术的增多，小儿全身麻醉药物的应用越来越广泛，但越来越多研究表明全身麻醉药物对于未成熟的大脑有毒性作用。众多的毒性机理研究中，全身麻醉药物导致细胞内钙离子紊乱受到众多认可，胞内钙离子控制着树突的发育、影响着神经元的增殖、分化和生存。电压门控和NMDA受体型钙离子通道依赖膜的去极化，但在胚胎及出生后早期开放几率较低，而TRPC通道主要受配体调控，不依赖膜的去极化，且其表达高峰期正处于此时期，故TRPC通道极有可能可以调整全身麻醉药物所致胞内钙离子紊乱，从而减少神经元的毒性作用。丙泊酚是小儿麻醉药中最常用的镇静药物，其能拮抗NMDA受体，从而可以导致细胞钙离子紊乱，引起细胞毒性，故本实验探讨TRPC通道激活对于丙泊酚引起的体外培养皮质神经元毒性作用的影响。　　目的：构建丙泊酚体外培养皮质神经元毒性模型及探讨TRPC通道的活化对模型的作用。　　方法：　　1：模型建立：将皮质神经元培养至7d，倒置相差显微镜观察神经元形态，Tubulin染色鉴定神经元纯度；将培养至7d的神经元随机分为八组，对照组（C组）正常培养，溶剂组（D组）加入0.1％DMSO，不同浓度丙泊酚培养组（P1~6组），终浓度分别为1、5、10、50、100、200umol/l,P1~6组于7d后加入不同剂量丙泊酚孵育6h，CCK-8鉴定细胞生存率，流式细胞学检测细胞凋亡率。　　2：测定添加剂毒性：将原代培养7d的皮质神经元随机分为3组，对照组（C组）正常培养；S组为7d时先用20μM SKF96365处理15min；O组为7d时先用100μM OAG处理10min；每组设5个复孔，通过CCK-8测定细胞生存率。　　3：测定添加剂效果：取培养至第7d皮质神经元，随机分为4组，C组作为对照组，为正常培养组；P100组为丙泊酚组，为加入含100μM的丙泊酚；P100+SKf组为拮抗剂组，加入丙泊酚前先用20μM的SKF96365处理15min，而后加入100μM丙泊酚孵育6h；P100+OAG组为激动剂组，加入丙泊酚前先用100μM的OAG处理10min，而后加入100μM丙泊酚孵育6h，CCK-8检测细胞生存率，流式细胞仪检测细胞凋亡率，Western blot检测TRPC6蛋白表达情况。　　结果：　　1：体外培养7天后皮质神经元胞体形态饱满，立体感强，突起增粗增长，形成密集交差的神经网络，适合进一步研究；　　2：Tubulin染色鉴定体外培养皮质神经元阳性率均达到90%以上。　　3：相比对照组，单纯加入0.1%DMSO对神经元生存率与凋亡率均无影响；与溶剂组D组比较，1μM丙泊酚孵育6h对神经元生存率与凋亡率无影响；5、10、50、100、200μM丙泊酚孵育6h，皮质神经元细胞生存率呈浓度依赖性降低，凋亡率呈浓度依赖性增高。　　4：与对照组相比较，单纯加入20μM SKF96365，对细胞生存率无影响；与对照组相比，单纯加入100μM OAG，与对照组相比，对细胞生存率无影响。　　5：Western blot显示C组、P100组、P100+SKF、P100+OAG皆有表达TRPC6蛋白，P100组表达略有下降，与C组比较，无统计学意义；而P100+SKF组TRPC6蛋白表达下降更多，P100+OAG表达增加，与C组比较，皆有统计学意义。　　6、与 P100组比较，P100+SKF组细胞生存率下降，凋亡率增加，差异均有统计学意义；与P100组比较，P100+OAG组细胞生存率上升，凋亡率下降，差异均有统计学意义。　　结论：　　1：丙泊酚对体外培养7天的皮质神经元有毒性作用，低浓度（1μM）孵育6h对细胞生存率无影响，高浓度（5、10、50、100、200μM）可抑制细胞生存率，增加细胞凋亡率。　　2：TRPC通道活化可减少丙泊酚在100μM浓度下对于体外培养皮质神经元的凋亡，提高其生存率，且TRPC6通道与其关系密切。