论文部分内容阅读
中医药是中华民族的瑰宝,利用现代先进的研究手段来探究中医理论和方药应用原则,用现代分子生物学的语言来阐明中药的作用机理,是促进中医药创新发展并实现现代化、国际化的迫切需要。
人参(Panax Ginseng C.A.Meyer)在我国已有两千多年的使用历史。红参是参的熟用品。红参中的有效成分对体液免疫和细胞免疫均有促进作用。人参皂甙Rgl、Rbl在增强免疫力上具有显著的功效。果蝇和哺乳动物有着相似的免疫反应的受体和信号转导途径,在先天免疫防御信号通路上有着共同的进化关系。利用果蝇作为免疫反应研究的模型,揭示红参提人类免疫力的分子机制具有重要的参考价值。
本研究利用实验室已经构建好的转Egfp基因果蝇1501纯合系为材料,以增强型绿色荧光蛋白Egfp作为报告基因代替果蝇抗菌肽drosomycin,通过观察EGFP的表达模式了解Drosomycin的表达情况。
将转基因果蝇分别在50mg/mL的红参培养基(Red Ginseng culture-medium,RC)及浓度分别为0.4％和0.8％的人参皂甙Rgl、Rbl培养基(Rgl-RC、Rbl-RC)中培养,以正常培养基(Normal culture-medium,NC)培养的转基因果蝇为对照,应用RealTime PCR、Western Blot及Elisa技术较系统地研究了红参、人参皂甙对EGFP及Toll信号转导途径关键基因的表达影响,对红参调控自然免疫系统的分子机制进行了初步探索,获得如下结果:
1、Western Blot结果显示,经M.luteus浸泡诱导,RC-果蝇的EGFP表达量明显高于NC-果蝇;0.8％人参皂甙Rgl、Rbl也能显著提高果蝇的EGFP表达量。该结果说明,在免疫诱导情况下,红参(人参皂甙)能显著促进免疫防御物质抗菌肽的表达。
2、Elisa的定量分析结果显示,免疫诱导后,RC-果蝇的EGFP表达量与NC-果蝇相比,差异达到显著水平(p＜0.05),是NC-果蝇的1.44倍,进一步说明了红参对自然免疫反应的促进作用。
3、Real Time PCR检测结果显示,多数Toil途径关键基因的转录受红参影响较小,红参提高果蝇免疫应答能力可能主要通过调控NF-κB因子实现。