研究背景与目的KRAB 型锌指蛋白(KRAB-containing Zinc finger protein,KZNF),其 N 端包含一类具有转录抑制功能的Krueppel-associated box(KRAB)结构域,通过与不同的特异性细胞细胞分子伴侣作用,在人红白血病,膀胱癌和乳腺癌等多种肿瘤的发生发展过程中起到调控功能。ZNF436的N端含有KRAB,是KRAB型锌指蛋白家族的一员,是MAPK通路上负性调控因子,参与细胞生长和凋亡,肿瘤的发生与发展的调控,然而与肝癌的相关性机制尚不清楚。TRIM28(Tripartite motif-containing proteins 28)是KRAB结构域的一个辅阻遏子,然而TRIM28形成的复合物具有类似MAPK通路上的酶抑制剂的功能,可影响泛素化通路上果糖-1,6-二磷酸酶(Fructose-1,6-biphosphatase,FBP1)的降解来促进肝癌的发生发展。两者可能共同影响肝癌的发生与发展。因此,本论文利用临床数据,细胞实验来初步探究ZNF436和TRIM28两者的关系及其影响肝癌发生发展的机制。研究方法分析浙江大学邵逸夫医院60例肝细胞性肝癌的病例和组织标本,探究ZNF436在肝癌和正常组织中的含量以及预后影响。通过构建FLAG-ZNF436的过表达慢病毒,并在LM3肝癌的细胞株中过表达,探究ZNF436对肝癌细胞增殖,凋亡和转移的影响。通过免疫纯化获取ZNF436的互作蛋白,胰酶酶解后得到肽段进行质谱检查,经过数据库搜索和相互作用蛋白的生物信息学和相互作用网络分析标本,并通过免疫印迹方法验证部分相互蛋白,探究ZNF436是否通过与TRIM28类似的通路来影响肝癌的发生与发展。结果60例肝细胞性肝癌配对标本中,qPCR,Western blot和免疫组化,均提示ZNF436在肝癌中呈低表达;在ZNF436过表达的LM3细胞株中,细胞的增殖能力较control组下降(P<0.05),而转移能力未见明显差异(1P>0.05)。通过免疫纯化获取ZNF436的互作蛋白质谱分析后,发现TRIM28与ZNF436之间联系紧密,通过生物信息学和相互作用网络分析,ZNF436可能通过结合TRIM28从而抑制FBP1的降解来抑制肝癌细胞的增殖。结论通过临床数据和细胞实验发现ZNF436在肝癌中呈低表达,而ZNF436与TRIM28结合形成复合物,从而影响泛素-蛋白酶体途径中所介导的TRIM28,引起其相互作用蛋白PBP1稳定性/抑制降解,达到抑制肿瘤生长的作用。