近年来,随着人们生活水平的提高,对健康的重视程度也越来越高。香菇是一种药食两用真菌,其主要代谢产物香菇多糖具有抗肿瘤、提高免疫力、抗病毒、抗氧化、降血糖等多方面的活性,是目前最具有开发前途的功能食品和药品资源之一。因此提高香菇多糖的产量具有较大的价值。培养基是影响微生物产生次生代谢产物的主要因素,香菇多糖的产量受培养基成分的影响。多糖代谢是一个复杂的生化过程,研究其具体的作用机制有助于提高香菇多糖的产量。实时荧光定量PCR是分析基因表达水平的一个重要手段,但其结果的可靠性依赖于很多因素,其中筛选合适的内参基因可以提高结果的可靠性。因此,本文以大宗栽培香菇品种新808为实验材料,测定不同碳氮源和pH值发酵条件下香菇生物量、胞内多糖及胞外多糖含量。同时分析了香菇10个内参基因在不同环境和条件下的稳定性,筛选出了最稳定表达的内参基因。以此为基础,通过RT-qPCR技术分析了多糖代谢途径中3个关键酶基因在不同碳氮源及pH发酵条件下的转录表达水平,结合多糖含量结果,分析了3个关键酶基因转录表达水平与多糖含量之间的关系,主要研究内容和结果如下:(1)不同碳氮源和pH发酵条件下,香菇菌丝体的生物量、胞内多糖和胞外多糖含量存在较大的差异。本实验所选择的6种碳源中,以淀粉作为碳源时香菇菌丝体的生物量和胞内多糖含量为最高,以麦芽糖作为碳源时胞外多糖含量最高;3种氮源中,以酵母膏为氮源的发酵条件下,其生物量、胞内多糖及胞外多糖含量均最高;5个pH发酵条件中,pH为7时生物量和胞内多糖含量最高,pH为5时胞外多糖含量最高。(2)以香菇不同碳氮源、不同pH、不同发育阶段及不同品种的c DNA为模板,荧光定量PCR扩增香菇10个候选内参,以得到的Cq值用Ge Norm、Norm Finder和Best Keeper三个软件进行稳定性分析,结果显示不同品种、不同发育阶段、不同碳氮源、不同pH值和所有样品中,最稳定的内参基因分别为Atu、18S、Rpl4、18S和Rpl2,其次分别是Rpl4、Btu、Atu、F-actin和Tsb,而最不稳定的内参基因分别为Pma、F-actin、F-actin、Rpl4和Pma。(3)通过RT-qPCR分析香菇多糖合成3个关键酶基因(UGP、PGI和PGM)在不同碳氮源及pH值下的转录表达水平,结果显示3个基因的表达存在差异性,表明这些基因在香菇多糖代谢过程中发挥重要作用。总的来说,UGP在所有样品中的相对表达量均最高。其中不同碳源条件下3个基因均在以淀粉作为碳源发酵条件下的相对表达量为最高;以酵母膏为氮源时,UGP和PGI的相对表达量最高;不同pH发酵条件下,除pH=6.5时,其余pH发酵条件下UGP转录表达水平差异不大,PGM在所有pH发酵条件下的转录表达水平不存在差异,当pH为6.0和6.5时,PGI的转录表达水平最高,分别为pH=7.0时的4.4和4.8倍。(4)以淀粉为碳源的发酵条件中,香菇多糖的含量最高,3个关键酶基因的转录表达水平也最高。以酵母膏为氮源时,胞内多糖和胞外多糖含量均最高,而UGP及PGI的转录表达水平也最高。pH值较高的发酵条件下,胞内多糖含量较高,但是胞外多糖含量则较低,3个关键酶基因的转录表达无明显的规律性。3个关键酶基因的转录表达水平与多糖含量在之间的并没有明显的相关性,表明多糖代谢途径以及基因转录后蛋白翻译和修饰的复杂性。