【摘 要】
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氰化物是冶金、化工,制药,纤维制造等工业排放的主要污染物,对农业生产和生态环境安全造成较大危害。应用物理和化学方法对氰化物污染治理成本高,并易造成二次污染,因此选择
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氰化物是冶金、化工,制药,纤维制造等工业排放的主要污染物,对农业生产和生态环境安全造成较大危害。应用物理和化学方法对氰化物污染治理成本高,并易造成二次污染,因此选择对环境安全的生物修复技术已成为治理氰化物环境污染的关键技术之一。木霉作为传统的生物修复微生物,已证明对氰化物污染具有一定的修复作用,但常需要借助与修复性植物的共生作用才能实现,而野生木霉菌单一使用对氰化物污染修复效率尚不理想,需要通过生物工程技术对其进行改良。限制性内切酶介导的基因整合技术(restriction enzyme mediated DNA integration, REMI)是目前通过插入突变进行真菌分子改良的重要途径。本文通过REMI插入突变技术,以Trichoderma koningii T30、Trichoderma atroviride T23和Trichoderma harzianum T21为出发菌,获得了81个转化子,并经过继代培养、PCR扩增和Southern blot,证明线性pV2质粒DNA已成功插入木霉菌基因组,单拷贝率达到71.4%,形成了优化的木霉菌分子改良技术体系,为今后克隆生物修复相关基因奠定了重要基础。分析了转化子降解氰化物相关酶系(硫氰酸酶和氰水合酶)活性,其中16株转化子(TkA2,TkA4,TkA8,
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