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目的:护士和病人作为高应激人群抑郁症的发病率显著高于普通人群,怎样降低这些群体抑郁的发病率值得关注。研究发现在面对应激时,应激耐受性高的个体更不易患抑郁症,探讨提高应激耐受性的方法并揭示其脑机制可以帮助高应激人群(护士和病人)预防抑郁症的发生。奖赏如食物、水、性和社会交往等会带来快感,能降低应激造成的负面影响,但在应激的过程中,奖赏发挥的具体作用以及在不同应激量下对应激耐受性的影响还暂不清楚。关于应激和奖赏单独的脑机制已有大量研究,但关于奖赏影响应激耐受性的脑机制少有报道。腹侧被盖区(VTA)和中缝背核(DRN)是奖赏的关键脑区,与应激也有着密切的联系,但其在奖赏影响应激耐受性中的作用尚不明确。已有研究表明,内源性大麻系统(ECS)以及下游代谢性谷氨酸受体5(mGluR5)与应激和奖赏密切相关,可能是奖赏影响应激耐受性的靶点。本研究应用社交挫败应激建立抑郁动物模型,在建模过程中给予不同的应激量及奖赏,通过行为学检测观察奖赏在不同应激量下对应激耐受性的作用,并探讨奖赏改变应激耐受性的脑机制,关注与奖赏和应激密切相关的VTA和DRN中的内源性大麻系统以及mGluR5,检测奖赏和应激对其表达水平的改变,明确奖赏影响应激耐受性的脑机制,为我们进一步了解奖赏对应激耐受性的作用,探讨构建高应激人群(如护士和病人)奖赏相关干预方案奠定基础。方法:(1)建立社交挫败应激模型,共建模21天,每天C57BL/6J小鼠被攻击鼠(CD-1)攻击10min后用透明隔板将其隔开,让它在能嗅到CD1气味但无身体接触的状态下度过这天剩下的时间。应激量大小通过逃避空间来定义,小应激量即建模时在大笼子中进行,大应激量即建模时在小笼子中进行;在建模的同时通过给予雌老鼠24小时陪伴作为奖赏。建模完成后通过行为学方法(社会交互、糖水偏好和强迫游泳)检测小鼠抑郁样行为。(2)运用Western Blot检测社交挫败应激和奖赏对大麻素受体1(CB1)和mGluR5在DRN和VTA脑区的蛋白表达情况的影响;qPCR检测CB1和mGluR5在mRNA水平的表达情况;液相色谱-质谱联用(LC-MS/MS)检测内源性大麻系统中的内源性配体AEA、2-AG在DRN和VTA脑区中的水平。(3)在社交挫败应激建模的同时每天给小鼠腹腔注射CB1激动剂或抑制剂,建模完成后检测行为学,观察药物激活或抑制CB1受体对小鼠抑郁样行为的影响。结果:(1)大应激量比小应激量导致更多的抑郁样行为。表现为大应激量下小鼠在社会交互区的社会交互指数显著低于小应激量组(p=0.039)和对照组(p<0.001),在角落区的社会交互指数显著高于小应激量组(p=0.019)和对照组(p=0.003);大应激量组在强迫游泳中的绝望行为更明显,表现为与小应激量组(p=0.033)和对照组(p=0.017)相比,不动时间更长,但开始不动的潜伏期没有差异;糖水偏好各组间的差异不显著。(2)在大应激量下,奖赏改变了小鼠的抑郁样行为。无奖赏组在社会交互区的社会交互指数显著低于奖赏组(p=0.006)和对照组(p<0.001),在角落区的社会交互指数显著高于奖赏组(p=0.024)和对照组(p=0.021);在强迫游泳实验中的不动时间无奖赏组也显著高于奖赏组(p<0.001)和对照组(p=0.006),但在开始不动的潜伏期和糖水偏好中差异不显著。在小应激量中,奖赏组(p=0.040)和对照组(p=0.020)在社会交互区的社会交互指数显著高于无奖赏组,但对小鼠在角落区的社会交互指数以及强迫游泳和糖水偏好中的表现影响差异不显著。(3)在大应激量下,奖赏组在社会交互区的社会交互指数(t=2.360,p=0.036)、角落区的社会交互指数(t=2.111,p=0.048)以及强迫游泳的不动时间(t=3.376,p=0.003)与无奖赏组的差值比在小应激量下更大,即与小应激量相比,在大应激量下,奖赏对抑郁样行为的作用更大,表现为更有效地改善了小鼠的社会交互行为,减少了社会回避行为和绝望行为。(4)通过qPCR检测奖赏对VTA和DRN脑区的CB1和mGluR5在mRNA水平表达的影响,结果发现在VTA脑区中,无奖赏组CB1的表达量显著低于奖赏组(p=0.049)和对照组(p<0.000),无奖赏组mGluR5的表达量显著低于奖赏组(p=0.028)和对照组(p<0.001);在DRN脑区中,无奖赏组CB1的表达量显著低于奖赏组(p=0.043)和对照组(p<0.001),无奖赏组mGluR5的表达量也是显著低于奖赏组(p<0.001)和对照组(p<0.001)。(5)通过Western Blot检测奖赏对VTA和DRN中CB1和mGluR5在蛋白水平的表达的影响,结果发现,在VTA脑区,奖赏组mGluR5的表达量显著高于无奖赏组(p=0.010)和对照组(p=0.030),在DRN脑区,无奖赏组mGluR5表达量显著低于奖赏组(p=0.042)和对照组(p=0.006)。而CB1在VTA和DRN脑区中的表达量在各组间差异无统计学意义。(6)2-AG在VTA脑区的表达量,奖赏组显著高于无奖赏组(p=0.002)和对照组(p=0.005),在DRN脑区的表达量,奖赏组显著高于无奖赏组(p=0.014)和对照组(p=0.043)。AEA在VTA脑区各组间差异不显著,在DRN脑区奖赏组(p=0.006)和无奖赏组(p=0.034)都显著低于对照组。同时,AEA(t=8.299,p<0.001)和2-AG(t=2.254,p=0.032)在VTA中的表达量显著高于在DRN中的表达量。(7)在每天社交挫败应激建模时,腹腔注射CB1激动剂(URB-597)和CB1抑制剂(AM251),建模完成后检测行为学发现,与CB1激动组(p=0.004)和对照组(p=0.015)相比,CB1抑制组在社会交互区的社会交互指数显著降低,在角落区的社会交互指数CB1抑制组显著高于CB1激动组(p=0.010)和对照组(p=0.003),糖水偏好CB1抑制组显著低于CB1激动组(p=0.012)和对照组(p=0.005),但对强迫游泳的不动时间和不动潜伏期影响差异不显著。结论:不同应激量会造成小鼠不同程度的抑郁样行为,影响应激耐受性;奖赏可以增强应激耐受性,改善抑郁样行为,且在大应激量下发挥的作用更大;奖赏会改变内源性大麻系统中的CB1受体、AEA和2-AG以及mGluR5在VTA和DRN脑区中的表达水平,降低应激造成的损伤。奖赏可作为一种干预方法应用到高应激人群(如护士和病人)中,以提高其应激耐受性,预防抑郁的发生,但应根据不同群体的应激特点设置相应的干预方案,内源性大麻系统和mGluR5或许也可以成为评价干预效果的检测指标。