猪流行性腹泻是由猪流行性腹泻病毒（Porcine epidemic diarrhea virus，PEDV）引起的一种以呕吐、腹泻、严重脱水为主要临床症状的高度接触性传染病。该病是我国及世界养猪国家引起仔猪早期死亡的重要疫病之一，给养猪业造成了严重经济损失。猪流行性腹泻病毒属于冠状病毒科冠状病毒属，是Ⅰ群冠状病毒的成员。目前对于PEDV感染机理方面的研究较少，2007年Li等证实猪氨基肽酶（porcine aminopeptidase N，pAPN）为PEDV的功能性细胞感染受体。至今，还未见其它有关PEDV感染机理以及pAPN在PEDV感染过程中作用的研究报道。　　 本项研究以病毒与特异性受体的作用是病毒感染继而大量增殖的基础为理论依据。首先在PEDV敏感细胞系Vero细胞中添加不同浓度的天然pAPN，并通过Vero细胞先吸附pAPN1h，不弃去pAPN吸附液，感染PEDV、先吸附pAPN1h，弃去pAPN液体，再感染PEDV和pAPN与PEDV在试管内作用1h后共同孵育Vero细胞等几种不同作用方式，通过蚀斑计数方式，观察pAPN对PEDV增殖的作用。结果表明，在Vero细胞中添加pAPN可增加蚀斑数，促进病毒增殖，其中添加5μg/mlpAPN蚀斑数最多，与病毒对照孔比较差异极显著，随着pAPN浓度的降低，蚀斑数逐渐减少，直到pAPN为0.1μg/ml时，与病毒对照比较差异不显著。并发现只有在pAPN先吸附于Vero细胞再接种PEDV，且将pAPN一直留在病毒感染体系中，这种添加方式能够最好的发挥pAPN对PEDV增殖的促进作用；将PEDV与pAPN在体外感作后吸附细胞，产生的蚀斑数少于病毒对照孔。　　 用天然pAPN制备了抗pAPN多克隆抗体，利用该多抗，通过间接免疫荧光法检测ST细胞及Vero细胞表面氨基肽酶的存在情况。结果显示ST细胞和Vero细胞均发出黄绿色荧光，但Vero细胞荧光亮度比ST细胞弱。说明两种细胞均含有氨基肽酶，但Vero细胞中氨基肽酶的含量少于ST细胞。为进一步确定：PEDV与pAPN结合的特异性，研究了抗pAPN抗体对PEDV增殖的影响以及对pAPN功能的影响。蚀斑减数试验结果显示抗pAPN抗体可以抑制PEDV在Vero细胞上的增殖，且可以抑制游离pAPN对PEDV增殖的促进作用，间接证明了病毒与受体结合的特异性。　　 为进一步探究pAPN的功能，研究了pAPN对PEDV吸附、侵入细胞的影响。结果显示，添加pAPN后，蚀斑数明显增加，病毒的侵入率由66.1％提高至82.2％，说明pAPN参与病毒的侵入过程，且对其有促进作用。添加pAPN试验组的吸附率比对照组吸附率约下降18％。目前，对PEDV的理化特性方面的研究较少，不能确定4℃是否仅能吸附不能侵入，本研究借鉴其它病毒的研究方法，探索PEDV的感染机理，虽不能确定pAPN在病毒吸附过程中的作用，但对进一步研究PEDV感染机制及pAPN功能等都有较高的参考价值。　　 为研究pAPN蛋白上与PEDV特异性结合的受体功能域，将pAPN基因截短获得目的基因J-P1、JP2，利用大肠杆菌表达系统pET32a（+）（E.coliRosetta），分别表达了JP1、JP2蛋白，用纯化后蛋白免疫小鼠制备相应的多克隆抗体。用ST细胞，经IFA鉴定JP1、JP2两蛋白的反应原性，结果显示抗JP1、JP2抗体均能与ST细胞表面的pAPN反应。通过蚀斑减数法研究抗JP1、JP2抗体对PEDV增殖的影响，结果显示，抗JP2抗体不能抑制PEDV在Veto细胞上的增殖；抗JP1抗体能够抑制PEDV在Vero细胞上的增殖，但其抑制作用比抗pAPN抗体弱。初步说明与PEDV结合的受体功能域可能存在于JP1中，但pAPN上受体功能域的精确定位还需进一步研究和验证，本研究结果为今后的试验和研究奠定了基础。